【摘 要】
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几丁质是构成昆虫外表皮的主要成分,在昆虫生长发育过程起到至关重要的作用。几丁质脱乙酰基酶（Chitin deacetylase,CDA）是几丁质降解过程中最先参与催化的酶,属于几丁质降解酶系,参与调节昆虫体内几丁质代谢。黄野螟是寡食性害虫,取食我国禁止贸易的二级保护植物土沉香（Aquilaria sinensis（Lour.）Gilg）,害虫发生时,植株的叶片、枝条数天便被啃食秃,严重影响了土沉香
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几丁质是构成昆虫外表皮的主要成分,在昆虫生长发育过程起到至关重要的作用。几丁质脱乙酰基酶（Chitin deacetylase,CDA）是几丁质降解过程中最先参与催化的酶,属于几丁质降解酶系,参与调节昆虫体内几丁质代谢。黄野螟是寡食性害虫,取食我国禁止贸易的二级保护植物土沉香（Aquilaria sinensis（Lour.）Gilg）,害虫发生时,植株的叶片、枝条数天便被啃食秃,严重影响了土沉香的生长、结香,为了减少造成大量物质损失,探寻绿色可持续的防治方法刻不容缓。本研究以黄野螟为研究对象,研究其CDA基因的功能,以期丰富CDA在昆虫方面研究,为探寻绿色防治害虫提供新思路。主要研究结果如下:（1）黄野螟CDA基因的鉴定及序列分析基于黄野螟成虫转录组数据库,鉴定了两条黄野螟CDA基因,命名为HvCDA1（登录号:MK389498）和HvCDA2（登录号:MK389499）。其中HvCDA1基因序列全长1957bp,ORF框长度为1620bp,编码氨基酸539个,理论编码蛋白质分子量61.59k Da,预测等电点为5.04。HvCDA1基因与其它同源比对的昆虫CDA1基因的氨基酸序列同源性达82.03%,且具有三个相同结构域;HvCDA2基因序列全长2 459 bp,其中ORF框长度为1 632 bp,编码氨基酸543个,理论编码蛋白质分子量61.70k Da,预测等电点为5.27,与其它同源比对昆虫CDA2基因氨基酸序列同源性达76.87%,具有三个相同结构域。（2）HvCDA1和HvCDA2基因的组织及发育龄期表达分析通过RT-qPCR确定了HvCDA1和HvCDA2基因表达谱,结果表明:在组织部位表达分析中,HvCDA1和HvCDA2基因表达量最高均位于体壁中,在马氏管中表达量最低;在发育龄期表达分析中,HvCDA1和HvCDA2基因均在所检测的发育阶段表达,在蜕皮前或后时两者表达量上升,并在蛹期的表达量显著高于幼虫期表达量。（3）注射20-羟基蜕皮酮（20E）后HvCDA1和HvCDA2基因表达分析注射2μL浓度为1μg/μL的20E于黄野螟4龄幼虫体中,在8h时,对照组转录本水平相对平稳,而实验组HvCDA1的m RNA表达水平显著升高,同样,在注射20E后,在8h时HvCDA2转录本水平也明显上升,显著高于对照组。说明HvCDA1和HvCDA2基因的表达受到蜕皮激素的调控。（4）HvCDA1和HvCDA2基因RNAi研究利用RNAi技术对黄野螟CDA基因进行研究。注射ds RNA于黄野螟体中将HvCDA1或HvCDA2基因沉默后,经RT-qPCR检测,在60h干扰效果最好,HvCDA1和HvCDA2基因干扰效率分别达74%和79%。同时,注射ds RNA将HvCDA1或HvCDA2敲除后,黄野螟出现畸形致死表型,其中注射ds HvCDA1的黄野螟有66.67%完成化蛹阶段,仅有23%完成羽化阶段。注射ds HvCDA2后的黄野螟有46.67%完成化蛹阶段,仅有6.7%完成羽化阶段。
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