等离子体诱变粘红酵母制备微生物油脂的研究

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油脂是人类生存和发展的必需品,是人类最重要的基本生活资料之一。我国是个油脂资源缺乏的国家,开发微生物源油脂具有重要的意义。利用微生物发酵法生产油脂不受场地、气候、季节等因素的影响,是一种极具前景的制备油脂的方法。随着生物技术的发展,通过对产油微生物进行诱变可获得高产油脂菌株,进而提高油脂应用效率。木质纤维素作为自然界中来源广泛、价格极为低廉且能再生的绿色资源,有望成为持续稳定地生产微生物油脂的原料。  采用等离子体诱变技术对粘红酵母进行诱变,最优诱变时间为60 s,菌体致死率达到91%,经反复筛选获得了一株高产油脂诱变菌株LA1。与野生菌相比,LA1油脂产量和油脂含量分别提高了17.6%和46.1%,具有良好的遗传稳定性,其油脂含量与植物油成分相似。最优发酵培养基为初始葡萄糖浓度70 g/L,氮源为硫酸铵,碳氮比为53,生物量、油脂含量、油脂产量较优化前分别提高了76.6%、26.4%及119%。  在5L发酵罐上进行了LA1高密度培养,当通气量1 vvm、转速400 r/min、残糖浓度为30 g/L时进行补料,共补料5次,采用两阶段补料策略使得生物量、油脂含量、油脂得率分别达到了96.5 g/L、58.8%及21.1%。  本文还研究了LA1以玉米芯水解液为原料发酵产油脂。在最优碳氮比75条件下,生物量和油脂产量分别为11.7 g/L和3.82 g/L。采用两阶段补料方式得到生物量、油脂产量及油脂含量分别为70.8 g/L、33.5 g/L和47.2%,无酸性产物生成。  利用荧光定量PCR技术对油脂合成过程中关键酶基因的表达进行研究。随着发酵时间的延长,ACC基因、D9基因和DGA1基因表达量增多。玉米芯水解液中糠醛对DGA1、D9及ACC基因表达具有抑制作用;乙酸对DGA1和D9基因表达具有促进作用,对ACC基因表达具有抑制作用;5-羟甲基糠醛对ACC、D9基因表达影响不显著,对DGA1基因表达具有抑制作用。
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