论文部分内容阅读
阿胶作为我国传统的中药,具有多种生理学功能,驴血清蛋白是阿胶中阿胶蛋白的主要组分,本研究主要目的是对提取的驴血清蛋白进行酶解,并对酶解工艺进行优化,采用超滤分离法得到分子量小于2500Da的具有生物活性的肽类物质组成的驴血清蛋白酶解物(HMP),对HMP的抗肿瘤活性和免疫活性进行初步研究,为驴血清的进一步开发利用以及功能性生物产品的研发提供一定的理论基础和实验依据。本研究首先采用单因素试验和响应面优化法确定了胰蛋白酶水解驴血清蛋白的最佳工艺参数为：酶添加量4000 U,pH值8,酶解温度50℃,酶解时间6h,此条件下驴血清蛋白的水解程度最大,蛋白质水解度的预测值为54.05%,实际测得的驴血清蛋白水解度为54.31%,与理论值相差0.481%。将驴血清蛋白酶解液进行膜分离,得到分子量小于2500 Da驴血清蛋白酶解物(HMP),对HMP进行ESI-MS质谱分析,分析发现HMP的分子量主要分布在200-500Da。通过体外试验研究了HMP对HepG2、HL-60及肝细胞L02生长的影响。MTT法分析了HMP对肝癌细胞系HepG2的抑制效果：在0.0001-1 mg/mL范围内,HMP对HepG2的抑制呈浓度依赖性和时间依赖性,在1 mg/mL时细胞抑制率最大达到31.57%。改良的MTT法分析了其对白血病细胞HL-60的抑制效果：在0.0001-1 mg/mL浓度范围和0-48 h作用时间内是呈剂量依赖性和时间依赖性,HMP作用于HL-60细胞24h后的IC50为1.442 mg/mL,72 h后的IC50为0.731mg/mL。MTT法分析了其对正常肝细胞生长的影响,发现HMP对正常肝细胞L02没有显著的抑制作用。通过HMP的体外免疫活性试验结果发现,体外单独作用正常小鼠脾淋巴细胞增殖和体外协同ConA作用正常小鼠脾淋巴细胞增殖实验中,HMP体外单独作用于小鼠脾淋巴细胞时,对其生长无明显影响,体外协同ConA作用于小鼠脾淋巴细胞时,在0.1-1mg/mL范围内能够显著促进小鼠脾淋巴细胞的增殖。综上研究表明,经酶解、超滤后得到分子量小于2500Da的驴血清蛋白酶解物,初步推断其具有抗肿瘤活性和体外免疫活性。