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背景与目的近年来,不孕不育症的患病率呈逐年增长趋势,不孕不育已是一个遍及全球的生殖健康问题。根据世界卫生组织的研究报道,全世界夫妇中不孕不育的比例达到10%~15%,在不孕不育症夫妇当中,男方不育所引起的占50%。因此,评估男性生育力与不育症诊断及有效治疗男性不育之间的联系,对男性生殖健康具有重要的临床意义。男性不育由于精液质量异常问题所导致的原因有许多,低下的精子活动力是重要的原因之一,临床上称之为弱精子症(Asthenozoospermia,AZS)。精子活力主要是指精子的前向运动能力。根据最新世界卫生组织(World Health Organization,WHO)第五版精液分析手册标准,临床对精液标本进行分析时,弱精子症精液参考区间:精子前向运动(PR)<32%,精子浓度≥15×106ml-1。由于弱精子症发病机制尚未研究透彻,因此,深入探究弱精子症的发病及其发展机制,对弱精子症治疗具有重要的意义。弱精子症的发病机制主要有:信号传导通路异常、线粒体能量代谢异常、精子尾部结构及生理功能异常等。哺乳动物成熟的精子主要由头部和尾部构成,精子尾部又称鞭毛。精子尾部主要包括四部分:颈段、中段、主段、末段,每一部分都对精子的运动起着至关重要的作用。精子尾部中段主要包含三部分:轴丝微管,外周的致密纤维,线粒体鞘。研究报道,目前男性不育的发生发展相关的精子基因数目已超过300个。为进一步阐明弱精子症的发病机制,本研究通过利用两种试验方法:逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot蛋白免疫印迹技术对弱精子症患者和正常男性精子中TEKT3和SMCP的表达情况进行检测,探讨TKET3和SMCP对特发性弱精子症发病的作用,为弱精子症的深入研究与探索其机制提供理论基础,为弱精子症(AZS)发病机制的进一步阐明和临床弱精子症的治疗提供实验依据。材料和方法1研究对象收集2014年6月至10月就诊于郑州大学第三附属医院男科门诊的50份弱精子症患者(年龄23-39岁)和50份同一时期人类精子库合格供精者(年龄20-40岁)精液标本。受试者采集精液前禁欲3~7天,手淫方式排精于取精杯中,待精液完全液化,按照WHO第五版《精液实验室分析手册》对精液标本进行分析,计算机辅助精液分析仪对同一份标本连续检测三次。所有受试对象纳入标准:(1).无传染病史,(2).无性功能障碍,(3).无家族遗传病史,(4).内分泌各项激素及肝肾功能检查正常。2方法2.1 RT-PCR利用RT-PCR方法,检测弱精子症患者与正常对照组男性精子TEKT3 m RNA和SMCP m RNA的表达水平情况。2.2 Western blot蛋白印迹利用Western-blot蛋白印迹方法,检测弱精子症患者与正常对照组男性精子TEKT3蛋白和SMCP蛋白的表达水平情况。3统计学处理采用SPSS17.0统计软件对结果数据统计分析,结果中计量的资料数据以`x±s表示。特发性弱精子症患者组与正常对照男性组TEKT3、SMCP m RNA和蛋白相对表达水平之间的比较,统计方法采用两独立样本的t-检验进行分析,Pearson相关系数(r)用来描述TEKT3、SMCP表达与精子前向运动能力的相关性,检验水准α=0.05。结果1 TEKT3 m RNA在两组精子中的表达情况两组精子中TEKT3m RNA相对表达量分别为:0.82±0.03、0.60±0.13,弱精子症患者与正常对照组相比,特发性弱精子症患者精子中TEKT3m RNA的表达显著降低(t=9.61,P=0.001)。2 TEKT3蛋白在两组精子中的表达情况两组精子中TEKT3蛋白的相对表达量分别为:0.78±0.03、0.57±0.12,弱精子症患者与正常对照组相比,特发性弱精子症患者精子中TEKT3蛋白的表达呈显著降低(t=10.09,P=0.001)。3 SMCP m RNA在两组精子中的表达情况SMCPm RNA在两组精子中的相对表达量分别为:0.93±0.44、0.27±0.11,比较两组精子中SMCPm RNA相对表达量,发现特发性弱精子症组精子中SMCPm RNA的表达呈显著降低(t=10.29,P=0.001)。4 SMCP蛋白在两组精子中的表达情况SMCP蛋白在两组精子中的相对表达量分别为:1.02±0.27、0.59±0.23,比较两组精子中SMCP蛋白的相对表达量,发现特发性弱精子症组精子中SMCP蛋白的表达表达显著降低(t=8.45,P=0.002)。5 TEKT3、SMCP在精子中表达水平与精子前向运动的相关性精子前向运动能力和TEKT3表达水平(r=0.718,P=0.001;r=0.729,P=0.001)和SMCP表达水平(r=0.705,P=0.013;r=0.716 P=0.001)分别具有相关性。结论 在特发性弱精子症患者精子中,TEKT3、SMCP的表达水平与精子活力正相关,两者的低表达与精子前向运动能力降低有关,可能参与了弱精子症的发生。