论文部分内容阅读
超数排卵-胚胎移植(Multiple Ovulation and Embryo Transfer,MOET)技术是优秀牛群快速扩繁的有效技术手段。但是,近50年来,在实际生产中奶牛超排效果一直没有得到明显提升,且不同牛只对外源促卵泡素(Follicle Stimulating Hormone,FSH)处理的反应程度存在巨大差异。因此,研究影响MOET效果的因素,尤其是FSH对超排的影响,对于提高MOET效果具有重要意义。超排效果良好维持的基础是卵泡能够正常发育和排卵,而卵泡的正常发育又依赖于类固醇激素(孕激素、雄激素、雌激素等)与促性腺激素(促卵泡素、促黄体素)等激素的调节。因此,研究FSH对卵泡类固醇激素合成相关基因表达的影响可能为提高MOET效率提供新的途径。本研究首先建立牛有腔卵泡的体外培养模型,在该基础上添加外源FSH,研究FSH对卵泡颗粒细胞和膜细胞类固醇激素合成相关基因表达的影响,以期为改善牛的超排效果提供理论支持。本研究内容主要包括2个方面,研究结果如下:试验一:不同直径奶牛有腔卵泡颗粒细胞和膜细胞类固醇激素合成相关基因的表达。试验通过qRT-PCR检测荷斯坦奶牛卵巢不同大小有腔卵泡(3-4 mm,5-8 mm,8 mm以上)的颗粒细胞和膜细胞内类固醇合成酶基因(CYP11A1、3β-HSD、CYP19A1、CYP17A1、17β-HSD)和促性腺激素受体基因(FSHR、LHR)的表达水平。颗粒细胞研究结果显示CYP11A1、CYP19A1、3β-HSD、FSHR和LHR在大卵泡颗粒细胞中的表达量皆显著高于中小卵泡(P<0.05),而中小卵泡组之间表达量差异不显著(P>0.05);17β-HSD在不同组卵泡之间表达量差异皆不显著(P>0.05)。膜细胞研究结果显示CYP11A1、3β-HSD、17β-HSD和FSHR在不同组膜细胞之间表达量皆没有显著性差异(P>0.05)。CYP17A1和LHR在大卵泡膜细胞中表达量显著高于中小卵泡(P<0.05)。此外,研究结果还证实同一时期卵泡颗粒细胞中FSHR表达量远高于LHR,而膜细胞中LHR远高于FSHR,说明颗粒细胞中以表达FSHR为主,膜细胞中以表达LHR为主。试验二:FSH对体外培养牛有腔卵泡颗粒细胞和膜细胞类固醇合成相关基因表达的影响。分离牛卵泡(9-11 mm),用添加不同浓度FSH的DMEM/F12进行24 h体外培养。qRT-PCR检测外源FSH处理对牛卵泡颗粒细胞和膜细胞类固醇合成酶基因(CYP11A1、3β-HSD、CYP19A1、CYP17A1、17β-HSD)和促性腺激素受体基因(FSHR、LHR)表达的影响。颗粒细胞的研究结果显示,25 ng/mL FSH处理显著上调了CYP11A1的表达(P<0.05),10 ng/mL FSH处理显著上调了3β-HSD的表达(P<0.05),50 ng/mL FSH处理显著上调CYP19A1的表达(P<0.05)。膜细胞的研究结果表明,50 ng/ml FSH处理显著上调CYP11A1、3β-HSD、CYP17A1和17β-HSD的表达(P<0.05),但是也观察到10和25 ng/mL FSH处理显著下调CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1的表达(P<0.05)。对FSHR和LHR的研究结果显示在颗粒细胞中,与对照组相比,25 ng/mL FSH处理显著上调FSHR的表达(P<0.05),10 ng/mL FSH处理显著上调LHR表达(P<0.05),50 ng/mL FSH处理对颗粒细胞FSHR、LHR表达没有显著影响(P>0.05);而50 ng/mL FSH处理却显著上调了膜细胞LHR的表达(P<0.05)。