几丁质是昆虫表皮、中肠围食膜等的重要组成成分,起到支撑昆虫身体和保护昆虫免受外界伤害的重要作用。在昆虫的生命活动中,几丁质在不断的合成和降解以满足昆虫生长发育所需。昆虫几丁质酶作用于几丁质并将其分解为小分子寡糖或低聚糖,在调节围食膜几丁质更新平衡、昆虫蜕皮中发挥着非常重要的作用。意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）作为传花授粉的重要经济和社会性昆虫,一直受到研究者的广泛关注。目前有关昆虫几丁质酶在昆虫蜕皮发育和表皮更新中降解几丁质的作用研究已有较多报道,然而,昆虫肠道也有几丁质酶分布但其在意大利蜜蜂肠道中的功能研究还鲜有报道。探索肠道几丁质酶的功能有助于为蜜蜂营养吸收以及肠道病源感染的研究做铺垫。本研究以意大利蜜蜂几丁质酶GH18家族成员Am Cht11基因（Bee Base登陆号GB47539）为研究对象,克隆鉴定了Am Cht11基因的c DNA序列,利用生物信息学分析了Am Cht11氨基酸序列特征,通过实时荧光定量PCR分析了Am Cht11基因在意大利蜜蜂幼虫各发育阶段和成虫主要身体组织的表达特征,最后采用体外喂食双链ds RNA的方法沉默成虫肠道Am Cht11基因的表达,并结合组织切片观察和分析了Am Cht11基因的表达被干扰沉默后,意大利蜜蜂肠道组织学、体重和存活等基本特征的变化,初步探讨了Am Cht11基因在意大利蜜蜂中的功能。主要研究结果如下:1、意大利蜜蜂几丁质酶Am Cht11的生物信息学特征。本研究利用生物信息学分析了意大利蜜蜂几丁质酶Am Cht11氨基酸序列的理化性质、保守基序、功能结构域、系统进化分类特征,预测了蛋白质的高级结构,结果表明:Am Cht11基因编码468个氨基酸,蛋白分子大小为53.4k D,等电点p I为7.08;氨基酸序列含有一个跨膜结构域和一个几丁质酶GH18家族特有的功能催化结构域,其催化域的四个氨基酸基序:“Rxxxxx GG”、“GAMx Lxx Nx D”、“Mx YDxx F”、“FPGx DLDWEP”高度保守;蛋白质结构与典型几丁质酶结构模型的相似性达37.25%,主要由α-螺旋（占比41.03%）、β-折叠（占比11.75%）、无规卷曲（占比27.99%）和延伸链（占比19.23%）组成;系统进化上与赤拟谷盗几丁质酶Tc Cht11亲缘关系最近,归类于几丁质酶GH18家族第Ⅷ亚家族。2、意大利蜜蜂几丁质酶基因Am Cht11的克隆及时空表达特征。本研究提取了意大利蜜蜂成虫总RNA,经反转录合成第一链c DNA,以此为模板通过PCR克隆鉴定意大利蜜蜂几丁质酶基因Am Cht11的c DNA全长为1404bp;通过实时荧光定量PCR分析发现,Am Cht11基因在成虫的头、足、胸、表皮、脂肪体、肠道各组织中均有表达,其中在肠道组织中的表达量相对较高。在幼虫的发育进程中,Am Cht11基因在第2-6日龄均有表达,且自第6日龄起表达量显著性上调,推测其可能是在为幼虫进入下一步发育阶段做准备。3、意大利蜜蜂几丁质酶Am Cht11在肠道组织的功能初探。利用大肠杆菌表达合成Am Cht11基因的双链RNA,以40μg/ml的浓度与食物混合后体外持续添食意大利蜜蜂成虫20天,监测第5、10、20天Am Cht11基因的表达特征。结果发现,添食ds RNA后第10天、20天意大利蜜蜂成虫肠道Am Cht11基因表达显著性下调,表明添食ds RNA能有效沉默肠道Am Cht11基因的表达;在成虫外观和肠道宏观形态方面,添食ds RNA前后处理组与对照组间无明显差异,但肠道微观组织切片观察发现沉默Am Cht11基因后中肠围食膜明显增厚。此外,ds RNA处理组意大利蜜蜂的体重和累计存活率均显著降低。综上结果,本研究推测认为体外添食Am Cht11基因的ds RNA,明显干扰沉默了意大利蜜蜂肠道内Am Cht11基因的表达,导致肠道围食膜因几丁质的降解困难而增厚,进而影响蜜蜂对食物营养的吸收,最终导致蜜蜂体重下降并死亡。