第—部分 临床研究目的：评价气虚痰浊型原发性高血压(Essential Hypertension, EH)患者血清脂联素(Adiponectin, Adipo,APN)水平的变化及其对高血压血管损伤的预测价值；评价益气化痰方药—复方芪麻胶囊对气虚痰浊型EH患者血清APN水平的影响。方法：选取中医证型为气虚痰浊、高血压1级或2级的EH患者84例,同时选取健康体检者30例,通过测定血清APN水平、臂-踝动脉脉搏波传导速度(Brachial—Ankle Artery PWV, baPWV)及肱动脉血流介导的血管舒张功能(Flow-mediated Diastoli c Function, FMD)水平,评价气虚痰浊型EH患者血清APN水平、baPWV及FMD水平的变化；分析气虚痰浊型EH患者血清APN水平与性别、年龄、血压、高血压病程、baPWV及FMD之间的相关性。将84例气虚痰浊型EH患者随机分为两组：常规降压治疗组(简称“常规组”)、常规降压联合复方芪麻胶囊治疗组(简称“联合组”),每组各42例。两组患者均停用原降压药物,按照本研究的给药方案进行治疗。常规组给予替米沙坦片治疗,如2W后血压控制不达标则加用苯磺酸氨氯地平片,视血压水平必要时进一步调整用药；联合组则在常规降压治疗的基础上,给予复方芪麻胶囊治疗,用药时间为8W。用药结束后,评价两组患者血压水平和临床症状的变化,并再次测定血清APN水平,对APN水平的相关影响因素进行分析。结果：(1)与校正性别、年龄的健康对照组相比,气虚痰浊型EH患者APN水平、FMD水平明显下降,baPWV水平明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。(2)气虚痰浊型EH患者血清APN水平与性别、年龄、血压无明显相关性(r分别为-0.135,0.167,-0.112,均P>0.05)；与高血压病程、baPWV显著负相关(r分别为-0.225,-0.242,均P<0.05),与FMD显著正相关(r为0.591,P<0.01)。(3)两组分别有39例和38例患者完成了治疗。治疗后两组收缩压、舒张压水平均显著下降(P<0.01),联合组收缩压水平显著低于常规组(P<0.05),而常规组舒张压水平显著低于联合组(P<0.01)。联合组降压总有效率89.47%,高于常规组的76.92%,但差异无统计学意义(P>0.05)。(4)治疗后两组中医症候积分均较治疗前显著下降(P<0.01),联合组中医症候积分显著低于常规组(P<0.05)。(5)治疗后两组患者血清APN水平均较治疗前有所增加。其中常规组与治疗前相比,差异无统计学意义(P<O.05)；联合组与治疗前相比,差异有统计学意义(P<0.01)。Logistic回归分析示,高血压病程和复方芪麻胶囊是APN水平的影响因素(OR分别为0.389,6.983,均P<0.01)。结论：(1)气虚痰浊型EH患者存在低APN水平,且其APN水平与baPWV显著负相关,与FMD显著正相关,提示APN可作为气虚痰浊型EH患者血管损伤的预测因子。(2)复方芪麻胶囊联合常规降压治疗可显著降低气虚痰浊型EH患者血压水平,同时可显著改善气虚痰浊型EH患者临床症状。(3)复方芪麻胶囊联合常规降压治疗可显著增加气虚痰浊型EH患者血清APN水平,结合前期研究,推测这可能是其改善高血压患者动脉僵硬度及血管内皮功能的机制之一。第二部分 实验研究目的：探索复方芪麻胶囊对高血压血管损伤的效果和机制。方法：选用14W龄的自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertersive Rats, SHR)为研究对象,以WKY大鼠(Wistar-Kyoto Rats, WKY)作为对照。SHR共50只,雌雄各半,按照体重随机分为SHR模型对照组、替米沙坦组、复方芪麻胶囊高剂量组(简称“芪麻高剂组”)、复方芪麻胶囊中剂量组(简称“芪麻中剂组”)、复方芪麻胶囊低剂量组(简称“芪麻低剂组”),饲养过程中于特定的时间点测量大鼠血压及体重。共饲养11W后(达25W龄)开始给药。SHR模型组及WKY组均给予蒸馏水(按10ml/kg体重,每天1次)灌胃,替米沙坦组按照7.2mg/kg/d的剂量,配药灌胃；芪麻高剂组为3.7152g生药/kg/天、中剂组为1.8596g生药/kg/天、低剂组为0.9288g生药/kg/天。给药周期为8W。给药完成后,麻醉下行颈动脉穿刺进行有创血压测量,以再次评定大鼠血压水平；采血,收集血清标本,分装后于-80℃超低温冰箱冻存待测；剪取1cm段主动脉,含血管周围脂肪组织(Perivascular Adipose Tissue, PVAT),置于中性甲醛中备用,将余下主动脉的PVAT和血管分离并分装后,置于-80℃超低温冰箱冻存待测。采用试剂盒测定各组大鼠血清APN和一氧化氮(NO)水平；进行HE染色,观察各组大鼠PVAT及主动脉形态改变；采用荧光定量(RT-qPCR)方法检测PVAT中APN及主动脉中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)、核转录因子P65(NF-K Bp65)、腺苷酸活化蛋白激酶a (AMPKa)、脂联素受体1(Adiponectin receptorl, Adipo R1)、脂联素受体2(Adiponectinreceptor2, Adipo R2)等的mRNA表达,以18S基因作为内参；采用蛋白质免疫印记(Western Blot.WB)方法,检测主动脉中Adipo R1, Adipo R2, APPLl, AMPK a及磷酸化AMPK　α (p-AMPK　α Thr 172).磷酸化eNOS (p-eNOS Ser 1177)的表达水平。采用免疫组化两步法检测各组大鼠主动脉Adipo R1的分布和表达水平。结果：(1)所用SHR模型高血压状态形成良好。与给药前比较,替米沙坦组、芪麻低剂组、芪麻中剂组、芪麻高剂组收缩压分别于给药1W后、4W后、6W后、8W后出现显著下降(P<0.01或P<0.05)(2)与WKY组相比,SHR模型组血清APN和NO水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。与SHR模型组相比,替米沙坦组、芪麻中剂组、芪麻低剂组APN和NO均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；芪麻高剂组APN和NO均有所上升,但差异无统计学意义(P>0.05)。(3)常规HE染色示,SHR模型组动脉中层弹性纤维增生,平滑肌细胞排列紊乱,替米沙坦组及复方芪麻胶囊各剂量组较上述有不同程度改善。各组大鼠主动脉内径、内-中膜厚度及PVAT中脂肪细胞形态和体积大小的差异均无统计学意义(P>0.05)。(4) RT-qPCR示,与WKY组相比,SHR模型组主动脉eNOS mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.0])；与SHR模型组比较,替米沙坦组、芪麻中剂量和低剂量组eNOS mRNA表达均明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。与WKY组相比,SHR模型组ICAM-1 mRNA表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)；替米沙坦组、复方芪麻胶囊各剂量组与SHR模型组相比,差异无统计学意义(P>0.05). SHR模型组NF-　k B p65 mRNA的表达也较WKY组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)；替米沙坦组、复方芪麻胶囊各剂量组与SHR模型组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。各组MCP-1 mRNA表达水平的差异均无统计学意义(P>0.05)。(5) RT-qPCR示,与WKY组相比,除AMPKa 2, SHR模型组PVAT中APN,主动脉中Adipo R1,AdipoR2和AMPK a 1的mRNA表达均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与SHR模型组相比,替米沙坦组APN, Adipo R1,AdipoR2和AMPK a 1 mRNA表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；芪麻低剂组APN, Adipo R1, Adipo R2, AMPK α1和AMPK α 2也显著升高,差异有统计学意义(P<0.50或P<0.01)；而芪麻中剂组Adipo R1,Adipo R2, AMPK α 1和AMPK a 2表达水平也较SHR模型组升高,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；芪麻高剂组Adipo R1和AMPK a 2表达也显著增加,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)(6)WB示,与WKY组相比,SHR模型组Adipo R1, Adipo R2, APPL1, AMPK α,p-AMPKα和p-eNOS蛋白水平均显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。与SHR模型组相比,替米沙坦组Adipo R1,APPL1, AMPK α和p-eNOS蛋白表达水平显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)；芪麻低剂组Adipo R1, Adipo R2, AMPK α,p-AMPK a和p-eNOS表达也明显增加,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；芪麻中剂组Adipo R2, AMPK α,p-AMPK α和p-eNOS表达也较SHR模型组明显上调,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；芪麻高剂组AMPK α,p-AMPK α和p-eNOS水平也明显上调,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(7)免疫组化示,AdipoRl在主动脉全层均有表达,尤其是中膜平滑肌细胞胞浆及内皮细胞胞浆。在WKY组,AdipoRl呈正常状态表达,SHR模型组AdipoRl的蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)；替米沙坦及复方芪麻胶囊各剂量组AdipoRl的表达均较SHR模型组显著增加,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论：(1)SHR高血压状态形成良好,是研究EH的可靠动物模型。(2)复方芪麻胶囊可显著降低SHR的血压水平,增加SHR血清APN及NO水平,减轻SHR主动脉损伤程度。(3)复方芪麻胶囊可显著上调SHR主动脉eNOS表达水平,对其他血管损伤相关因子如ICAM-1,MCP-1, NF-k B p65等影响不显著。(4)复方芪麻胶囊可能通过影响PVAT/APN相关通路,增加主动脉eNOS的表达和活性,促进NO释放,从而减轻高血压血管损伤。