蒙古沙冬青AmDREB1和AmDREB2基因的克隆与功能分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:wangxiangbin
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DREB(Dehydration responsive element binding)类转录因子在植物抗逆基因表达调控网络中起重要作用,是目前植物抗逆性分子机理和基因工程研究中最受关注的一类调节因子。本论文利用PCR方法从强抗逆植物蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongloicus)中克隆到AmDREB1的cDNA和基因组DNA,对该基因和实验室之前克隆的AmDREB2进行了表达分析和转基因功能鉴定,获得下列主要研究结果:1.通过半定量RT-PCR方法对AmDREB2进行表达分析,显示其参与蒙古沙冬青对外源ABA的应答反应。2.成功将AmDREB2编码区cDNA片段连接到植物超表达载体pCAMBIA3301上,并通过农杆菌介导法转化拟南芥,经筛选和鉴定获得T3代纯合株系。将AmDREB2在拟南芥中超表达无生长抑制现象,并能提高转基因株系的耐盐和耐旱性。3.在AmDREB2转基因株系中,胁迫Marker基因RAB18和RD29A及Na+/H+反向转运器AtNHX1基因的表达量比野生型中明显增高,表明这些基因受AmDREB2的调节,与该基因的功能有关。4.采用PCR方法克隆到AmDREB1基因的编码框cDNA和基因组DNA,均由474 bp组成,无内含子。推测其编码蛋白由158个氨基酸残基组成,分子质量为39.1 KDa,等电点为5.20,含1个AP2结构域和核定位信号,很可能定位于细胞核。通过半定量RT-PCR方法进行表达分析,表明AmDREB1的转录受高盐、ABA、干旱和低温胁迫的诱导,尤其在低温和干旱胁迫下其表达量明显上调。将AmDREB1编码区cDNA构建到植物诱导表达载体上,然后转化拟南芥并进行了初步表型鉴定,发现该基因不能明显提高耐盐性。
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