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杂色鲍(Haliotis diversicolor)属软体动物门,腹足纲,前鳃亚纲,原始腹足目,鲍科,是我国南方鲍种,因其生长迅速,经济价值高,在南海海域得到广泛养殖。但长期以来遭受疾病困扰,致使鲍鱼养殖业经常遭受重大损失,而迄今尚无有效的免疫防治措施。为探索鲍的免疫相关机制,本实验室前期利用SSH技术,构建了细菌攻毒杂色鲍血淋巴细胞SSH cDNA文库,发现细菌感染下杂色鲍血淋巴细胞中细胞色素P450(CYP7A1)与谷胱甘肽硫转移酶(abGSTsigma)基因上调表达,推测在鲍体内CYP7A1与abGSTsigma不仅参与异源物质的代谢过程,也可能参与机体的免疫应答过程。本研究拟在此基础上,对杂色鲍分别进行BaP暴露与细菌攻毒,观察在两个不同刺激过程中CYP7A1,与abGSTsigma基因分别在杂色鲍体内的诱导表达情况,从而对CYP7A1与abGSTsigma是否参与异源物质的代谢以及可能的免疫应答过程做出分析。取得的主要研究成果如下。1,利用RACE技术克隆了杂色鲍CYP7A1与abGSTsigma cDNA全长序列:CYP7A1 cDNA序列(GeneBank登录号为EF587282)全长2185bp,包含一个1494bp的开放阅读框,编码498个氨基酸,其理论分子量为57557.0Da,等电点为6.56。abGSTsigma cDNA序列全长1328bp(GeneBank登录号为EF546619)。包含有一个624bp ORF,编码208个氨基酸,其理论分子量为23.67KDa,等电点为5.67。2,CYP7A1与abGSTsigma mRNA在健康杂色鲍的存在情况:利用Real-time PCR技术检测了CYP7A1与abGSTsigma在健康杂色鲍体内的不同组织器官(鳃、血淋巴细胞、消化腺、外套膜、腹足、上足、性腺、肾、粘液腺)中的转录表达情况,结果表明abGSTsigma、CYP7A1,基因均广泛的在各种组织中表达。其中外套膜,鳃等表达量较高,腹足,消化腺和次之,血淋巴细胞表达量最低。3,在BaP暴露条件下CYP7A1与abGSTsigma两种基因在杂色鲍不同组织中的表达变化:在BaP诱导下abGSTsigma在消化腺、鳃、外会膜、血淋巴细胞4个组织中均上调表达,酶活性也有提高。而CYP7A1则仅在血淋巴细胞中有上调表达,在外套膜、消化腺、鳃中无上调表达。4,在细菌攻毒条件下CYP7A1与abGSTsigma两种基因在杂色鲍不同组织中的表达变化:abGSTsigma在被检测的4个组织中均显著上调表达,酶活性也有提高。而CYPTA1则仅在血淋巴细胞中有上调表达,在消化腺、鳃中无上调表达。5,研究结果表明abGSTsigma可能参与了免疫应答过程:abGSTsigma基因在细菌感染和BaP暴露下都在不同组织中显著表达,表明杂色鲍abGSTsigma基因可能参与鲍体内异源物质代谢与免疫应答两个过程。而CYP7A1基因仅在血淋巴细胞中表达,推测在杂色鲍体内,CYP7A1可能与免疫应答过程相关,而与异源物质代谢相关性较小。