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绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae，MO）引起的绵羊传染性胸膜肺炎（Contagious ovine pleuropneumonia）对养羊业的发展造成严重的威胁。自噬是真核细胞中保守的降解途径，亦可降解侵入性病原体，在细胞的生存、抗感染免疫等方面起着重要作用。
本实验室前期研究发现MO可以诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7自噬，且自噬抑制了MO在胞内的增殖。研究认为，核苷酸结合寡聚结构域蛋白2(nucleotide binding oligam erization domain2，NOD2)作为胞内模式识别受体，能够识别侵入的病原菌，诱导细胞自噬;并且可以通过激活JNK途径引发下游反应以抵抗病原菌感染。然而，在MO感染RAW264.7过程中，JNK-Bcl-2/Beclin1通路是否参与MO诱导的RAW264.7自噬;NOD2是否可以识别MO;在MO诱导的RAW264.7自噬过程中，NOD2与JNK-Bcl-2/Beclin1存在怎样的联系？相关问题，有待阐明。
本研究首先采用MO感染RAW264.7细胞，通过激活、抑制或干扰NOD2，结合免疫荧光、RT-PCR、Western Blot和mRFP-GFP-LC3双荧光标记蛋白等技术，分别从形态学水平和分子水平，探讨NOD2对MO诱导RAW264.7细胞自噬的调控作用。通过上述实验，获得研究结果如下:
1.MO感染RAW264.7细胞后，NOD1蛋白表达无显著差异;NOD2蛋白表达趋势与MO诱导的自噬水平相一致。激活NOD2后，自噬体与MO共定位数量增多;抑制NOD2后，结果相反。实验结果证实，NOD2参与MO诱导的RAW264.7自噬，而NOD1不参与此过程。
2.MO感染RAW264.7细胞后，当过表达NOD2时，自噬流增强，自噬相关基因和蛋白Atg5、Atg7、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平升高，且限制胞内MO的增殖;当NOD2表达被抑制时，结果相反。表明NOD2参与调控MO诱导的RAW264.7细胞自噬过程，并对MO在RAW264.7细胞中的增殖具有明显的影响。
3.MO感染RAW264.7细胞后，胞内p-JNK1/2、LC3-Ⅱ/Ⅰ表达量升高，自噬小体显著增多;当sp600126抑制JNK后，p-JNK1/2、LC3-Ⅱ/Ⅰ表达量降低，自噬小体减少。结果证明JNK参与调控了MO诱导的RAW264.7细胞自噬。
4.MO感染RAW264.7细胞后，当过表达NOD2时，p-JNK、p-Bcl-2、Beclin1表达水平升高;而干扰NOD2后，结果相反，表明NOD2可以调控JNK通路。sp600126抑制JNK通路后，NOD2对MO诱导的RAW264.7细胞自噬不再具有调控作用。即NOD2调控MO诱导的RAW264.7自噬依赖于JNK-Bcl-2/Beclin1通路。
研究结果表明，激活NOD2后促进MO诱导的R。AW264.7自噬，抑制/干扰NOD2后MO诱导的RAW264.7自噬水平降低，且NOD2通过调控RAW264.7自噬限制胞内MO增殖;进一步研究发现NOD2通过依赖性JNK-Bcl-2/Beclin1途径参与MO感染所诱导的RAW264.7自噬。
本实验室前期研究发现MO可以诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7自噬，且自噬抑制了MO在胞内的增殖。研究认为，核苷酸结合寡聚结构域蛋白2(nucleotide binding oligam erization domain2，NOD2)作为胞内模式识别受体，能够识别侵入的病原菌，诱导细胞自噬;并且可以通过激活JNK途径引发下游反应以抵抗病原菌感染。然而，在MO感染RAW264.7过程中，JNK-Bcl-2/Beclin1通路是否参与MO诱导的RAW264.7自噬;NOD2是否可以识别MO;在MO诱导的RAW264.7自噬过程中，NOD2与JNK-Bcl-2/Beclin1存在怎样的联系？相关问题，有待阐明。
本研究首先采用MO感染RAW264.7细胞，通过激活、抑制或干扰NOD2，结合免疫荧光、RT-PCR、Western Blot和mRFP-GFP-LC3双荧光标记蛋白等技术，分别从形态学水平和分子水平，探讨NOD2对MO诱导RAW264.7细胞自噬的调控作用。通过上述实验，获得研究结果如下:
1.MO感染RAW264.7细胞后，NOD1蛋白表达无显著差异;NOD2蛋白表达趋势与MO诱导的自噬水平相一致。激活NOD2后，自噬体与MO共定位数量增多;抑制NOD2后，结果相反。实验结果证实，NOD2参与MO诱导的RAW264.7自噬，而NOD1不参与此过程。
2.MO感染RAW264.7细胞后，当过表达NOD2时，自噬流增强，自噬相关基因和蛋白Atg5、Atg7、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平升高，且限制胞内MO的增殖;当NOD2表达被抑制时，结果相反。表明NOD2参与调控MO诱导的RAW264.7细胞自噬过程，并对MO在RAW264.7细胞中的增殖具有明显的影响。
3.MO感染RAW264.7细胞后，胞内p-JNK1/2、LC3-Ⅱ/Ⅰ表达量升高，自噬小体显著增多;当sp600126抑制JNK后，p-JNK1/2、LC3-Ⅱ/Ⅰ表达量降低，自噬小体减少。结果证明JNK参与调控了MO诱导的RAW264.7细胞自噬。
4.MO感染RAW264.7细胞后，当过表达NOD2时，p-JNK、p-Bcl-2、Beclin1表达水平升高;而干扰NOD2后，结果相反，表明NOD2可以调控JNK通路。sp600126抑制JNK通路后，NOD2对MO诱导的RAW264.7细胞自噬不再具有调控作用。即NOD2调控MO诱导的RAW264.7自噬依赖于JNK-Bcl-2/Beclin1通路。
研究结果表明，激活NOD2后促进MO诱导的R。AW264.7自噬，抑制/干扰NOD2后MO诱导的RAW264.7自噬水平降低，且NOD2通过调控RAW264.7自噬限制胞内MO增殖;进一步研究发现NOD2通过依赖性JNK-Bcl-2/Beclin1途径参与MO感染所诱导的RAW264.7自噬。