【摘 要】
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目的:研究内皮细胞表达的清道夫受体（scavenger receptor expressed by endothelial cell-Ⅰ,SREC-I）在烟曲霉菌（Aspergillus fumigatus,A.fumigatus）性角膜炎中发挥的免疫作用及其具体机制。方法:1.收集6例确诊烟曲霉菌性角膜炎患者的角膜标本,6例供体角膜作为正常对照,免疫荧光法检测角膜中SREC-I蛋白的表达。2.用
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目的:研究内皮细胞表达的清道夫受体（scavenger receptor expressed by endothelial cell-Ⅰ,SREC-I）在烟曲霉菌（Aspergillus fumigatus,A.fumigatus）性角膜炎中发挥的免疫作用及其具体机制。方法:1.收集6例确诊烟曲霉菌性角膜炎患者的角膜标本,6例供体角膜作为正常对照,免疫荧光法检测角膜中SREC-I蛋白的表达。2.用灭活的烟曲霉菌菌丝刺激人角膜上皮细胞,采用RT-PCR法检测不同时间点SREC-I m RNA的水平变化,Western blot法检测不同时间点SREC-I蛋白的表达水平变化。3.使用终浓度为200n M的SREC-I si RNA和NC si RNA预处理人角膜上皮细胞48小时,菌丝分别刺激细胞8小时和24小时,采用RT-PCR法检测刺激8小时各组细胞中SERC-I、IL-1β、TNF-α及LOX-1 m RNA水平的变化,ELISA法检测刺激24小时各组细胞上清液中IL-1β和TNF-α蛋白水平的变化。4.用烟曲霉菌分生孢子混悬液角膜基质内注射感染C57BL/6小鼠模型,取感染后12小时、24小时、48小时的小鼠角膜,以正常小鼠角膜作为对照,采用RT-PCR法和Western blot法分别检测各组小鼠角膜中SRECI m RNA和蛋白水平的表达,取感染后48小时的角膜进行免疫荧光染色。5.烟曲霉菌感染C57BL/6小鼠前一天结膜下注射SREC-I中和抗体和对照Ig G 20μg/10μL进行预处理,感染后1小时腹腔内注射SREC-I中和抗体和对照Ig G 200μg/100μL,在感染后1天、3天、5天对小鼠角膜进行临床评分评估角膜炎的严重程度;收集感染后12小时的小鼠角膜,采用RT-PCR法检测各组角膜中SREC-I、IL-1β、TNF-α、CXCL-1及LOX-1 m RNA水平的变化,ELISA检测48小时小鼠角膜中的IL-1β和TNF-α蛋白水平;取感染后48小时的小鼠眼球行苏木精-伊红染色分析。结果:1.SREC-I在正常的人角膜上皮中表达,烟曲霉菌性角膜炎患者角膜上皮中的SREC-I蛋白表达水平明显高于正常人。2.在正常未处理和烟曲霉菌刺激后的人角膜上皮细胞中均检测到SREC-I的表达,SREC-I m RNA的表达水平在刺激后8小时达到高峰,蛋白水平在刺激后36小时开始升高。3.SREC-I si RNA有效抑制了人角膜上皮细胞中SREC-I的表达;与使用200n M NC si RNA预处理的人角膜上皮细胞相比,在烟曲霉菌刺激前给予人角膜上皮细胞200n M SREC-I si RNA预处理,可以显著减少烟曲霉菌感染角膜上皮细胞中炎症因子IL-1β、TNF-α和LOX-1的表达水平。4.正常小鼠角膜和感染烟曲霉菌的小鼠角膜中均检测到SREC-I的表达,且感染后SREC-I的水平明显升高,烟曲霉菌感染的小鼠角膜中SREC-I m RNA的表达水平在感染后12小时达到高峰,蛋白水平在感染后2天开始升高。5.SREC-I中和抗体抑制了烟曲霉菌感染的小鼠角膜中SREC-I的表达;与Ig G对照组相比,给予小鼠角膜SREC-I中和抗体处理后,烟曲霉菌感染1天、3天、5天的小鼠角膜炎症反应明显减轻,临床评分显著降低;在感染后12小时检测到使用SREC-I中和抗体处理的小鼠角膜中CXCL-1、LOX-1、IL-1β和TNF-α的m RNA水平明显降低,感染后48小时SREC-I中和抗体处理组中的IL-1β和TNF-α蛋白水平同样明显低于对照组。结论:SREC-I在正常角膜上皮中表达,烟曲霉菌感染后SREC-I的m RNA和蛋白表达水平明显升高;抑制SREC-I在人角膜上皮细胞及小鼠角膜中的表达,可以降低烟曲霉菌刺激引起的炎症因子水平升高。提示烟曲霉菌可能通过SREC-I介导角膜上皮中的固有免疫反应,SREC-I介导的炎症通路可能成为治疗真菌性角膜炎的新靶点。
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