褶皱臂尾轮虫减数分裂相关基因BpDMC1的克隆与初步分析

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褶皱臂尾轮虫(Brachinorus plicatilis)属轮虫门单巢纲,其生活史中存在孤雌生殖和有性生殖两种繁殖方式,即世代交替现象.轮虫混交雌体(有性生殖雌体)和非混交雌体(孤雌生殖雌体)外部形态没有明显差别,但内部生理机制明显不同.生物学工作者分别从不同角度对诱导轮虫有性生殖的原因进行研究,种群密度、环境温度、pH值、盐度、DO、渗透压、光照、食物的种类、大小和丰度等都成为轮虫学家关注的问题,但不同的学者对于同一条件的诱导效果的解释亦不相同有的甚至争议很大.我们认为减数分裂是轮虫由孤雌生殖向有性生殖转变的关键事件,对其进行分子生物学研究将有助于从根本上认识轮虫有性生殖及其发生的原因.该论文是根据其它生物已知减数分裂相关基因DMC1/RAD51/RecA的保守序列设计简并引物,用PCR及RT-PCR的方法从褶皱臂尾轮虫中扩增出减数分裂相关基因类似物片段BpDMC1,并对其碱基序列及其编码的氨基酸序列进行了分析.所取得的主要结果如下:1.建立了提取褶皱臂尾轮虫基因组DNA和总RNA的体系.经凝胶电泳检测,其质量基本达到分子生物学实验技术要求,能够用于PCR和RT-PCR分析.2.根据其它生物已知减数分裂相关基因保守结构域设计了两对引物.采用PCR和RT-PCR方法,从褶皱臂尾轮虫基因组DNA及其总RNA中分别扩增到大小为504bp和417bp的片段.3.分别对基因组DNA的PCR产物及RT-PCR产物克隆成功的重组子进行测序.将得到的7个片段采用美国国立生物技术信息中心BLAST程序,DNssist2.0软件和Dnastar软件进行分析发现:其中1个DNA片段和2个cDNA片段在碱基序列上均有一定程度的同源性,在氨基酸序列上则有较高的同源性(64.5﹪~86.2﹪).这是轮虫门中第一个被克隆的减数分裂相关基因的同源类似物.将褶皱臂尾轮虫的此氨基酸序列与其它七种生物的相应序列比对并构建进化树,发现其与Dictyostelium discoideum(阿米巴虫)遗传距离最近,与Caenorhabditiselegans(线虫)最远.对BpDMCl基因5端和3端的序列有待进一步研究.
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