【摘 要】
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目的:研究广西北部湾红树林植物内生放线菌多样性、新颖性及抗菌活性,以期发现放线菌新物种和抗菌活性菌株,为完善放线菌物种多样性和发现新抗生素提供菌种资源储备。方法:62份植物样品经表面消毒粉碎后,撒在10种分离培养基上分离植物内生放线菌;通过PCR扩增和测序获得其16S rRNA基因序列,并提交到Ez Bio Cloud数据库中进行相似性搜索比对分析及构建基于16S rRNA基因序列的系统进化树,对
【基金项目】
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国家自然科学基金（81603079）; 贵州省科技厅基金（黔科合基础[2019]1347）
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目的:研究广西北部湾红树林植物内生放线菌多样性、新颖性及抗菌活性,以期发现放线菌新物种和抗菌活性菌株,为完善放线菌物种多样性和发现新抗生素提供菌种资源储备。方法:62份植物样品经表面消毒粉碎后,撒在10种分离培养基上分离植物内生放线菌;通过PCR扩增和测序获得其16S rRNA基因序列,并提交到Ez Bio Cloud数据库中进行相似性搜索比对分析及构建基于16S rRNA基因序列的系统进化树,对放线菌多样性进行分析;采用分子分类研究、生理生化研究和细胞化学组分研究等多相分类方法对6株潜在新菌株进行鉴定;采用PCR方法扩增87株放线菌NRPS、PKS Ⅰ、PKS Ⅱ等抗生素生物合成基因簇,然后用琼脂糖凝胶电泳进行检测;通过部分菌株发酵、乙酸乙酯萃取发酵液得到粗提液样品,并采用纸片扩散法对样品进行抗菌活性筛选。结果:从植物样品共分离出菌株795株,其中放线菌416株,分布于14个目23个科39个属,包括放线异壁酸菌属（Actinoallomurus）、放线链孢菌属（Actinomycetospora）、游动放线菌属（Actinoplanes）、短状杆菌属（Brachybacterium）、Catenuloplanes、纤维单胞菌属（Cellulomonas）、纤维微菌属（Cellulosimicrobium）、Cryptosporangium、短小杆菌属（Curtobacterium）、甲基萘醌菌属（Demequina）、Gryllotalpicola、栖白蚁菌属（Isoptericola）、动球菌属（Kineococcus）、Klenkia、皮革球菌属（Kytococcus）、雷夫松氏菌属（Leifsonia）、微杆菌属（Microbacterium）、微球菌属（Micrococcus）、小月菌属（Microlunatus）、小单胞菌属（Micromonospora）、微白霜菌属（Micropruina）、贫养杆菌属（Modestobacter）、分支杆菌属（Mycobacterium）、Mycolicibacterium、诺卡氏菌属（Nocardia）、类诺卡氏菌属（Nocardioides）、海藻球菌属（Phycicoccus）、Protaetiibacter、Pseudactinotalea、假动球菌属（Pseudokineococcus）、Quadrisphaera、红球菌属（Rhodococcus）、罗氏菌属（Rothia）、糖多孢菌（Saccharopolyspora）、丝氨酸球菌属（Serinicoccus）、Sphaerimonospora、链霉菌属（Streptomyces）、Wangella和威廉姆斯氏菌（Williamsia）。其中短小杆菌属（33.9%）、链霉菌属（16.1%）、微杆菌属（8.2%）和Mycolicibacterium（7.5%）为优势菌属。基于16S rRNA基因序列分析11株菌为潜在放线菌新种。鉴定木榄来源菌株MASK1Z-5T为短状杆菌属的一个新种并命名为Brachybacterium halotolerans sp.nov.;鉴定白骨壤来源菌株BSK3Z-2T为海藻球菌属的一个新种并命名为Phycicoccus avicenniae sp.nov.;鉴定无瓣海桑来源菌株KQZ13P-1T和MAQZ13P-2为海藻球菌属的一个新种并命名为Phycicoccus mangrovi sp.nov.;鉴定秋茄来源菌株GBK3QG-3T为类诺卡氏菌属的一个新种并命名为Nocardioides mangrovi sp.nov.;鉴定无瓣海桑来源菌株KQZ13P-5为微白霜菌属的一个新种并命名为Micropruina sp.nov.。通过对76株放线菌和11株潜在放线菌新种进行抗生素生物合成基因簇分析,结果表明NRPS、PKS Ⅰ、PKS Ⅱ基因阳性率分别为34.5%、30.0%和63.2%,64株放线菌至少含有一种生物合成基因簇,阳性率为73.6%。15株放线菌至少对一种检定菌（枯草芽孢杆菌、耻垢分枝杆菌、白色念珠菌和粪肠球菌）表现出抑菌活性,抑菌圈大小范围为8-27 mm。结论:广西北部湾红树林植物内生放线菌丰富多样,其放线菌资源有潜力从中发现新颖的放线菌物种和抗生素。
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