桑黄中多酚类物质的提取工艺优化及生物活性研究

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桑黄是我国著名的药用真菌,作为中药入药已有2000多年的历史。桑黄类真菌种类繁多,目前桑黄孔菌属Sanghuangporus中共有15个物种,中国有10种。现代药理学研究表明,桑黄具有抗肿瘤、抗炎、降血糖、提高身体免疫力、抗氧化等多种药理活性,研究开发价值很高。桑黄的诸多药理活性源于桑黄所含的多糖、黄酮、酚类、三萜等生物活性物质。综合文献发现,近年来对于桑黄的研究多集中在多糖方面,而对于其中的多酚类物质研究还较少,因此,本论文以6种不同种类的桑黄为研究材料,从多酚类物质的高效提取、分离及其药理活性评价等方面展开。主要工作分为以下四个方面:(1)暴马桑黄中多酚类物质的提取工艺优化。首先以培养了6个月的暴马桑黄为研究材料,采用超声辅助深共熔溶剂(DES)提取法提取暴马桑黄中的多酚类物质,探索了不同提取条件对暴马桑黄多酚类物质提取率的影响。根据单因素实验结果,结合采用响应面法对提取工艺进行优化。实验结果表明:由氯化胆碱和苹果酸组成的DES提取效果最好,为6.37 mg/g,提取率是乙醇作为提取溶剂时的1.5倍。通过响应面优化,得到的最优提取工艺为:提取时间42 min,提取温度58℃,料液比为34 mg/g,含水率39%,此条件下暴马桑黄中多酚类物质提取率达到12.58 mg/g,此结果充分展示出DES作提取溶剂时的优越性。(2)高效液相色谱法测定不同种类桑黄中的多酚类物质。利用高效液相色谱法,从纵向和横向两方面系统地比较了不同桑黄在不同发育阶段利用不同提取方法提取时,多酚类物质种类和含量的差别。在建立的分析方法准确性良好,实验仪器精密度良好的情况下,实验结果显示:当提取条件相同,桑黄种类相同的情况下,菌丝体中多酚类物质的种类和含量多于子实体中的;当桑黄种类相同,发育阶段相同,提取方法不同时,DES作为提取溶剂时提取到的多酚类物质的种类和含量多于乙醇作为提取溶剂时;当提取条件相同,发育阶段相同,不同种桑黄间多酚类物质的种类和含量存在较大差别。(3)桑黄中多酚类物质的生物活性检测。分别对5种桑黄子实体的提取物进行体外抗氧化实验,研究结果表明,无论是哪种桑黄的提取物都具有较强的清除自由基的能力,在一定浓度范围内,提取物浓度和抗氧化活性呈正相关,当浓度为0.3 mg/m L时,对自由基的清除率达到最高。说明桑黄中的多酚类物质有较强的还原力,是一类天然的抗氧化剂。抑菌结果显示,桑黄中多酚类物质对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌没有明显的抑制性。(4)利用网络药理学初步探讨桑黄中化合物与肝癌相互作用的分子机制。利用网络药理学分析方法,建立桑黄中的化合物与肝癌的相互作用网络,找到关键基因靶点,并分析其作用机制。结果显示,桑黄中的关键化合物可能是作用在细胞质、等离子体膜上的GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)、AKT1(蛋白激酶)、TNF(肿瘤坏死因子)等基因上,并通过癌症信号通路、m TOR信号转导通路等通路以催化或结合的方式对刺激作出反应,从而在预防和治疗肝癌中起重要作用。本课题从实验和理论两方面,探究了桑黄多酚类物质的提取方法、桑黄多酚类物质的生物活性、不同桑黄种类间多酚类物质种类和含量的差别以及桑黄中化合物与肝癌之间的相互作用机制,为下一步桑黄的研究提供了方向,奠定了基础。
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