杨柳田头菇种质资源及突变株分子标记研究

来源 :昆明理工大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:sadddddd
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本研究对杨柳田头菇(Agrocybe salicacola)的野生资源及其无孢突变菌株进行了深入的研究。其研究内容包括遗传多样性、与相似种的分类与鉴定、与无孢性状相关分子标记开发和无孢突变菌株细胞学和形态学特征。以在云南省采集的18个杨柳田头菇和茶树菇(A.cylindracea)野生资源为材料,通过AFLP技术分析其遗传多样性及种间关系,并利用信息素受体鉴定杨柳田头菇和茶树菇并分析其多样性。研究结果表明:杨柳田头菇这一类的遗传相似系数均大于0.87,菌株之间的亲缘关系相对较近,说明该种具有较高的遗传一致性,遗传基础相对狭窄,这表明杨柳田头菇种内分化不大。而茶树菇菌株的遗传相似系数分布范围为0.54~0.84,可见云南的茶树菇种质资源之间存在较大的遗传多样性,说明茶树菇种内分化较大,在地理隔离或者其它因素影响下,存在种下单位分化的可能性。此外,茶树菇的遗传多样性也为选种育种提供了丰富的遗传材料和应用前景。根据信息素受体核酸序列构建的系统发育树结果显示:信息素受体核酸信息在物种分布上存在差异,可用作物种区分的指标。从茶树菇和杨柳田头菇的信息素受体分布来看,由杨柳田头菇YAASM0894菌株扩增得到的6个片段分布于Ⅰb、Ⅰc、Ⅰe和Ⅱb组中,说明菌株中包含的交配型基因信息有较丰富的多态性。在茶树菇YAASM1024菌株中也有相似的现象,由其扩增得到的5个片段分别分布于Ⅰa、Ⅰc、Ⅰe和Ⅱb组中,这种丰富的多态性信息为物种遗传差异分析提供了依据。而根据氨基酸序列构建的最小进化树与信息素受体核酸序列分析结果相似,也可将这些菌株划分成Ⅰ和Ⅱ两大类群,其下面可再分为A-G七个组,其中位于B和D组中的片段均来自于茶树菇,而C、E和F组的片段均自于杨柳田头菇。A组为最大一个分支,包括了杨柳田头菇的10个菌株的信息素片段受体和茶树菇YAASM0594的两个片段,表明此A组信息素受体是两个物种中较为保守且分布广泛的。G组也包含了来自茶树菇和杨柳田头菇的信息素受体。从核酸和氨基酸序列的聚类分析进化树来看,根据氨基酸序列构建的最小进化树更自然,其种类区分更显著,来自茶树菇的序列聚集较为集中。另外,来自相同采集区域菌株的信息素受体氨基酸序列较为接近。因此,根据信息素受体氨基酸序列分析构建的系统发育树,可用于区分茶树菇和杨柳田头菇,并作为其遗传和生态分布分析的依据,还可为田头菇属交配型基因组成结构分析提供有用资料。同时,本研究以前期实验所得的杨柳田头菇无孢突变菌株为材料,对其担孢子发育阻滞原因进行调查,开发与无孢性状相关的AFLP分子标记并尝试将其转化为SCAR标记,并对突变的无孢菌株与正常的产孢菌株进行了形态学和细胞学的观察比较。结果表明:对于供试材料,256对引物组合能够筛选出与无孢性状相符的6个AFLP标记,将其成功转化为2个SCAR标记后能对供试菌株进行筛选,但不能广泛用于无孢性状选育工作,并且克隆的杨柳田头菇AFLP片段序列也具有丰富的多态性。而染色显微观察结果则表明该无孢突变菌株是由于没有担子小梗产生,担子凝聚为单核,从而抑制担孢子的形成。
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