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热激蛋白(Heat Shock Proteins,HSPs)是生物体适应环境最为重要的一类蛋白质。在生物体受到外界环境的刺激时,如：缺氧、紫外线、物理伤害等,热激蛋白的表达量都会上调。研究发现,几乎所有的生物体中均含有热激蛋白(古生菌除外)。热激蛋白90(Heat Shock Protein90, HSP90)是热激蛋白中,研究的最多的一类。近些年的研究表明,hsp90基因的表达对昆虫的生长发育具有很重要的作用。在赤拟谷盗中,干扰最后一个龄期幼虫的hsp90基因导致其不能化蛹,且复眼发育异常。对果蝇蜕皮激素信号转导的研究表明,HSP90参与了这个信通路,并且hsp90基因于蜕皮激素受体的激活具有必不可少的作用。雌激素相关受体(estrogen-related receptor, ERR)属于核受体超家族,它是第一个被发现的孤儿核受体,分为ERRa, ERR(3和ERRy三种类型。其中ERRa和ERRy的表达状况还可作为确诊哺乳动物某些肿瘤的特征物,尤其是ERRa现在已经被认定其为乳腺癌的标志之一。ERR能够以不同的方式参与由雌激素介导的信号通路,在骨骼组织和乳腺组织中的研究发现,雌激素相关受体与雌激素受体(estrogen receptor, ER)具有相同的靶基因。ERR在昆虫中的研究还比较少,对果蝇的研究表明,ERR参与了糖酵解的调节,并且在其生长发育和代谢调控过程中也起到了重要作用。本论文分别对拟黑多刺蚁体内的hsp90基因及黄脸油葫芦体内的ERR基因进行了研究。拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina Roger)属于昆虫纲,多刺蚁属,营群居生活,在我国主要分布于云南西双版纳的热带雨林。由于其特殊的生长环境,使此种昆虫具有特殊的药用价值,对于肝脏疾病、糖尿病、风湿等,有良好的治疗效果。拟黑多刺蚁有严格的品级分化,行为复杂,是研究昆虫个体发育研究比较好的材料。拟黑多刺蚁的hsp90基因已经在本实验室由薛立娟硕士获得全长,在NCBI上的序列号为：JN100104.1。本实验以拟黑多刺蚁为材料,用原位杂交的方法对hsp90在拟黑多刺蚁头部的表达进行定位,探讨hsp90基因的功能。同时利用T7试剂盒合成双链RNA,对拟黑多刺蚁的hsp90基因进行干扰,运用荧光实时定量PCR研究干扰效率,同时检测hsp90干扰之后,相关基因EcR和USP的表达,研究hsp90基因与其相关性。实验结果如下：(1)通过原位杂交的技术方法,对拟黑多刺蚁hsp90基因在三个品级头部的表达进行定位。结果表明,hsp90基因在拟黑多刺蚁的三个品级的头部均有表达,但是表达量较少。在雌蚁头部的阳性反应相对强烈,在工蚁和雄蚁的头部表达量少,阳性反应较弱,表明hsp90基因可能对雌蚁的行为有一定的调节作用。结果还显示,hsp90基因在拟黑多刺蚁不同品级的头部表达均匀,没有明显的阳性反应区域,说明拟黑多刺蚁的hsp90基因可能与动物的行为有联系,但是没有特别的联系；(2)克隆拟黑多刺蚁hsp90的相关片段,在5’端加上T7启动子,得到的片段用于合成了双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA),将其与食物混合,饲喂蚂蚁,并用荧光实时定量PCR对干扰的效率进行检测。在连续喂食14天后,采用荧光实时定量PCR的方法,检测到在拟黑多刺蚁的3个品级中,hsp90基因的表达均有下调,其中雌蚁的表达下调了52.45%,雄蚁的表达下调了71.12%,工蚁下调了44.45%；在干扰了hsp90基因后,检测结果表明USP的表达下调明显,EcR的表达虽然也发生了下调,但是不明显；表明hsp90的表达和USP基因之间可能存在一定的相关性。黄脸油葫芦(Teleogryllus emma (Ohmachi&Matsumura))属于蟋蟀科,油葫芦属,广泛分布于我国各个省市。油葫芦体型较大,喜欢栖息在草原和稻田附近,身长一般为18-26mm,,全身呈现褐色或黑褐色,头较大,圆球形。从头部正面看,有个很像倒着的“八”字结构,这也是黄脸油葫芦识别的标志之一。黄脸油葫芦的ERR以及EcR基因已由本实验室由何慧博士克隆获得其全长,GenBank数据库中的序列号为分别为FJ770332和HQ131915。由于黄脸油葫芦体型大,因此采用注射法进行RNA干扰。设计两对引物,合成dsRNA,注射入昆虫体内。试验结果如下：(1)利用ERR全长合成的特异性引物,经RT-PCR得到两个片段,Seql和Seq2,长度分别为528bp和632bp,给这两个片段加上T7启动子,合成dsRNA进行干扰。结果显示,两个片段均可以产生干扰效应,但是由Seql合成的ds-Seq1的效果更好；(2)以Seql合成的dsRNA对黄脸油葫芦的ERR基因进行干扰,荧光实时定量PCR的结果表明,雌虫和雄虫的ERR基因在mRNA水平表达均有下调,与对照组相比,雌虫表达下调了50.2%,雄虫的表达下调了55.3%；(3)在对ERR干扰成功的个体中,提取RNA,检测其中EcR的表达。结果表明,当ERR被干扰后,雌性个体中的EcR基因下调了75.99%,而在雄性个体中的结果显示,EcR基因的表达上调了17.57%。结果说明在黄脸油葫芦中,ERR和EcR可能在功能上具有相关性,这种相关性可能因昆虫性别的不同而不同。本实验为进一步研究hsp90基因和ERR基因在昆虫中的功能及作用提供初步依据。