研究目的:颞下颌关节紊乱病（temporomandibular disorder,TMD）是口腔颌面部常见的疾病之一,主要影响颞下颌关节（temporomandibular joint,TMJ）及与之相关的颌面肩颈部肌肉群,主要症状表现为关节弹响,运动障碍及关节区或相关肌肉疼痛等。颞下颌关节炎（temporomandibular joint osteoarthritis,TMJ OA）是TMD的重症表现之一。软骨细胞凋亡是骨关节炎（osteoarthritis,OA）的病理表现之一。目前公认的OA的主要原因是异常的应力刺激。我们前期的研究表明给SD大鼠施加单侧前牙反（unilateral anterior crossbite,UAC）的异常咬合刺激可诱导髁突软骨发生退行性改变,给体外培养的大鼠髁突原代软骨细胞施加流体剪切应力刺激（flow fluid shear stress,FFSS）可以诱导软骨细胞发生凋亡。一氧化氮（nitric oxide,NO）是细胞中一种重要的信号分子,在细胞增殖分化和氧化应激保护中发挥重要作用。然而,过量的NO会抑制软骨基质的合成,导致软骨变性。诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,i NOS）在病理刺激下产生大量NO可导致线粒体损伤,引发内源性细胞凋亡。本研究旨在探讨TMJ OA中NO的来源及其在异常力刺激下软骨细胞凋亡中的作用。研究方法:采用我们报道的SD大鼠UAC动物模型和软骨细胞FFSS体外模型。在动物模型中,通过苏木精—伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,HE）和番红O染色法（Saffron O staining,SO）显示髁突软骨形态学变化,实时定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）检测软骨合成代谢标志基因II型胶原（Type II Collagen,COL2）、蛋白多聚糖（aggrecan）,和分解代谢标志基因金属蛋白酶13（Matrix Metalloproteinase13,MMP13）、聚蛋白多糖酶5（A Disintegrin And Metalloproteinase with Thrombospondin Motifs,Adamts5）;PT-PCR和免疫组织化学法（immunohistochemistry,IHC）检测i NOS的表达水平;末端标记法（Terminal-deoxynucleoitidyl Transferase Mediated Nick End Labeling,TUNEL）检测凋亡细胞、IHC检测半胱天冬酶-9（caspase-9）和半胱天冬酶-3（caspase-3）的表达水平来评估髁突软骨的凋亡情况。在体外模型中,评估线粒体损伤,用试剂盒测量NO和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）的产生水平,IHC分别检测细胞色素C（cytochrome C,Cyt C）在线粒体内外的表达水平。在体内和体外模型中均用RT-PCR和IHC分析凋亡相关蛋白如B细胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma 2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、caspase-3和聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶1（poly-ADP-ribose polymerase 1,PARP1）的表达水平。同时在UAC及FFSS模型中引入i NOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（NΩ-Nitro-L-Arginine Methyl Ester Hydrochloride,L-NAME）重新检测上述指标,测定L-NAME对软骨细胞凋亡的影响。结果:数据显示UAC诱导SD大鼠髁突软骨退行性改变,细胞凋亡增多,并刺激caspase-3/-9和i NOS的表达。FFSS上调了大鼠髁突软骨细胞中i NOS、SOD和NO的表达,降低了线粒体膜电位,促进Cyt C进入细胞质,软骨细胞发生凋亡。这些变化都可以被i NOS抑制剂L-NAME逆转。结论:NO参与并介导了异常咬刺激造成的下颌髁突软骨线粒体损伤和软骨细胞凋亡。抑制NO的产生可能是一种TMJ OA治疗策略。