目的：　　 1．通过原核表达系统分别制备MAGE-3CTL和B细胞联合表位的融合蛋白，即ozlf-142、ozlf-151、ozlf-153蛋白。　　 2．将纯化的ozlf-142、ozlf-151、ozlf-153蛋白和Trx-His蛋白分别免疫小鼠，制备鼠血清抗体，采用间接ELISA方法及Westernblot法初步分析表位融合蛋白的免疫原性。　　 3．以三种融合蛋白作为诊断抗原，用ELISA法检测胃癌患者、乳腺癌患者、慢性胃炎患者及健康者血清中特异性抗体水平，探索其作为特异性诊断抗原的可行性。　　 方法：　　 1．蛋白的制备：将重组质粒转化成功的E.coliBL21(DE3)菌，进行原核表达，超声破碎法提取蛋白，用Ni-NTA树脂亲和层析法分别纯化，用SDS-PAGE、WesternBlot分析鉴定。　　 2．选择6～8周龄雌性BALB/c小鼠，随机分5组，即三种表位多肽组、Trx-His蛋白组及PBS组，免疫小鼠，于免疫后第0w、3w、5w和7w行尾静脉取血，制备免疫血清抗体。采用间接ELISA法检测在不同免疫时间的抗体效价，用纯化蛋白与小鼠血清做WesternBlot分析。　　 3．以三种融合蛋白作诊断抗原，用间接ELISA法检测胃癌患者(231例)、乳腺癌患者患者（112例）、慢性胃炎患者（57例）及健康者(116例)血清特异性抗体。根据健康组血清平均值计算出阳性判定值（即Cutoff值），以此评估胃癌患者及乳腺癌患者的血清抗体阳性检出率及ELISA方法诊断胃癌及乳腺癌的敏感度和特异度。　　 结果：　　 1．通过原核表达系统获得了纯化的MAGE-3CTL和B细胞联合表位的融合蛋白。并经SDS-PAGE电泳和WesternBlot分析鉴定证实，三种表位肽蛋白分别位于分子量约为20KDa处的单一蛋白条带。　　 2．经间接ELISA法检测，三种表位融合蛋白免疫BALB/c小鼠均可获得较高效价的免疫血清，抗体效价随免疫次数增加而升高；WesternBlot结果显示三种表位蛋白均可以与小鼠血清特异结合，产生单一条带，三种多肽蛋白抗体间产生无明显差异。　　 3．以融合蛋白作为抗原检测胃癌、乳腺癌、慢性胃炎患者及健康者血清MAGE-3表位肽特异性抗体，检测结果分别用方差分析，胃癌和乳腺癌组与胃炎及健康组血清抗体效价之间均有显著性差异(P＜0.05)。三种融合蛋白的Cutoff值分别为0.431、0.402、0.372，判断胃癌组、乳腺癌组、慢性胃炎组和健康组抗体阳性率显示：各组间阳性率有统计学意义(P＜0.05)。而两两比较显示：ozlf-142蛋白组胃炎/乳癌P=0.067＞0.0083，ozlf-153蛋白组健康/胃炎有统计学意义(P=0.008＜0.0083)，其余各组中乳腺癌组、胃癌组与健康组、胃炎组均有有统计学意义(P＜0.0083)。　　 结论：　　 1．通过原核表达系统及Ni-NTA树脂亲和层析法可获得纯度较高的表位蛋白，三种表位融合蛋白免疫BALB/c小鼠血清学检测，表明预测的3个CTL和B细胞联合表位融合蛋白均能刺激机体产生抗体，其具有较强的免疫原性，抗体效价随免疫次数增加而升高；为MAGE-3相关疾病的诊断及疫苗的设计提供了理论基础和实验依据。　　 2．以三种融合蛋白作为诊断抗原，用ELISA法可以成功检测胃癌患者和乳腺癌患者血清特异性抗体，三种融合蛋白具较强的抗原性，对胃癌及乳腺癌诊断试剂的研究和对下一步免疫效应研究奠定了基础。