杨树是世界主要的造林和经济树种之一,在世界各地特别是中国均有广泛的栽培。欧美107 杨是从欧洲黑杨与美洲黑杨的杂交后代中选育出的一个无性系,具有抗逆能力强、材质好和速生等优点,它既可作为绿化树种,又可作为优质的纸浆原料,在工业用材中发挥重要作用,为目前推广的主要品系之一。几丁质酶可以将几丁质水解为N-乙酰氨基葡萄糖,大量研究表明,几丁质酶在植物体内和体外,对病原真菌的生长均有明显的抑制作用。豇豆胰蛋白酶抑制剂能抑制昆虫肠道蛋白酶活性,使昆虫生长发育缓慢,甚至死亡,具有广谱的抗虫作用。本研究选择欧美107 杨作为转基因的实验材料,研究了激素浓度等因素对其叶片的芽再生、继代、生根等方面的影响,建立了杨树高频再生体系。在此基础上,将编码豇豆胰蛋白酶抑制剂和几丁质酶的基因分别构建植物表达载体,以欧美107 杨叶片为外植体,利用改良的农杆菌介导法进行转化,获得转基因植株。具体试验结果如下: 1. 建立了欧美107 杨离体叶片的高频芽再生体系。研究结果表明,不同的激素浓度配比对欧美107 杨组培苗不同外植体的分化和生长有重要影响。通过不同激素浓度配比的实验,确定了最佳继代培养基(MS + 0.15mg/L 6-BA + 0.1mg/L IBA + 0.1mg/L KT)、叶片芽再生培养基(MS + 0.5mg/L 6-BA + 0.1mg/L IBA)和生根培养基(MS + 0.05mg/L NAA)。pH值、琼脂浓度、温度、湿度等其他物理因素对其也有影响。2. 分别进行了选择性抗生素卡那霉素与潮霉素的敏感性试验,结果表明卡那霉素(Km)20 mg/L 可作为诱导叶片芽再生临界筛选和生根时筛选抗性植株的使用浓度; Km30 mg/L 可作为继代培养筛选抗性植株的使用浓度。而潮霉素对外植体毒害很大,不宜用作欧美107 杨的筛选抗生素。3. 用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107 杨中。经过严格的Km 筛选,得到了Km 抗性(Km~r) 植株。对部分Km~r 植株进行PCR 及PCR-Southern 杂交鉴定,证实CpTI 基因已整合到杨树基因组中。转基因植株的饲虫实验表明,部分株系的叶片可在一