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结直肠癌是我国目前最常见的消化道恶性肿瘤之一,其发病率高、死亡率高,严重危害人们健康。尽管近年来大肠癌的治疗效果有了明显改善,但其五年生存率仍不尽人意。因此对结直肠癌的发病机制进行研究、探索结直肠癌的新治疗靶点,具有重要临床意义。现有的研究表明,miR-301b-3p在多种肿瘤组织内呈高表达状态。MiR-301b-3p可促进肿瘤的增殖,迁移,与多种癌症的发生和发展有关,但miR-301b-3p在结直肠癌中的潜在功能仍不清楚。本研究旨在探讨miR-301b-3p在结直肠癌中的潜在作用和可能机制,有望为结直肠癌治疗提供新的生物标志物和治疗靶点。第一部分:miR-301b-3p在结直肠癌发展中的作用研究目的:分析miR-301b-3p在结直肠癌组织和细胞系中的表达,并探讨miR-301b-3p在结直肠癌恶性生物学中的作用。材料与方法:通过RT-qPCR检测miR-301b-3p在结直肠癌组织和邻近正常组织中的表达水平,以及在结直肠癌细胞系Caco-2（MSI-H）,SW480(（MSS）,HCT-116（MSI-H）,HT-29（MSS）,DLD-1（MSI-H）和正常结肠上皮细胞NCM460中的表达差异。使用miR-301b-3p模拟物转染结直肠癌DLD-1和HT-29细胞系,然后利用细胞计数试剂盒（CCK-8）、集落形成、细胞划痕试验和transwell试验检测细胞增殖和迁移能力的变化。结果:RT-q PCR结果显示,结直肠癌组织中miR-301b-3p的表达高于邻近正常组织,此外,miR-301b-3p与大肠癌患者的恶性预后相关。与正常结肠上皮细胞相比,结直肠癌细胞中的miR-301b-3p也明显上调（DLD-1和HT-29是所有CRC细胞中表达水平最低的,它们分别代表MSI-H（DLD-1）和MSS（HT-29）两种不同类型的结直肠癌,因此我们选择它们进行后续功能实验）。RT-q PCR结果表明,转染miR-301b-3p模拟物后,DLD-1和HT-29细胞系中的miR-301b-3p显著上调;CCK-8、集落形成、细胞划痕试验和transwell试验的结果表明miR-301b-3p的过表达促进了结直肠癌细胞的增殖和迁移。结论:MiR-301b-3p在结直肠癌中高表达,miR-301b-3p的过表达能显著促进结直肠癌细胞的增殖和迁移。MiR-301b-3p可能是结直肠癌中一种肿瘤启动子,介导结直肠癌的恶性生物学行为。第二部分:miR-301b-3p在结直肠癌进展中的机制研究目的:探讨miR-301b-3p在调控结直肠癌发生、发展中的分子作用机制。材料与方法:根据Target Scan数据库进行生物信息学分析预测HOXB1 m RNA的3’UTR与miR-301b-3p互补,这表明HOXB1可能是miR-301b-3p的一个假定下游靶点。采用双荧光素酶报告实验检测荧光素酶活性的变化,来验证miR-301b-3p与HOXB1的结合位点。用设计好的HOXB1 si RNAs转染HT-29和DLD-1细胞,敲除HOXB1,RT-q PCR和Western blot检测转染效率,CCK-8、集落形成、细胞划痕试验和transwell试验来检测HOXB1基因敲除对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响。最后,为了确定miR-301b-3p是否通过HOXB1加速HT-29和DLD-1细胞的增殖和迁移,使用miR-301b-3p模拟物或NC（模拟）和（或）pc DNA-HOXB1质粒对HT-29和DLD-1细胞进行处理,再用RT-q PCR、western blot、CCK-8、集落形成、细胞划痕试验和transwell试验来验证miR-301b-3p与HOXB1相互之间的关系。结果:生物信息学分析和双荧光素酶报告证实HOXB1为miR-301b-3p的下游靶向m RNA。抑制HOXB1可加速结直肠癌细胞的增殖和迁移。miR-301b-3p模拟物可显著降低结直肠癌细胞HOXB1的表达,这种作用可被HOXB1的过度表达部分逆转。结论:MiR-301b-3p通过靶向HOXB1促进结直肠癌细胞的增殖和迁移。MiR-301b-3p/HOXB1信号轴在结直肠癌的发病机制中起着关键作用,可能是结直肠癌发生、发展的重要通路。