成骨生长肽促进大鼠骨髓间充质干细胞成脂、成骨分化

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目的 观察成骨生长肽(OGP)在成脂及成骨性培养基中对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖分化的影响。 方法 Percoll法分离大鼠骨髓间充质干细胞,通过频繁更换培养液及反复传代的方法纯化细胞。用传至2代细胞作MTT实验,以此确定OGP对MSC起作用的最大活性浓度;传3代MSC接种于6孔培养板上,共接种13板,分为成脂、成骨诱导两组,每板细胞都分为实验组和对照组,对照组不含成骨生长肽,实验组含有10-11mol/L的成骨生长肽。脂肪细胞鉴定:成脂诱导7、14、21天各取1板细胞做实验,用TG试剂盒在全自动生化分析仪上测定细胞中甘油三酯的总量;成脂诱导21天后取预置盖玻片的1板细胞行脂肪细胞油红O染色。成骨细胞鉴定:取成骨诱导8、12、16天细胞各2板,分别用ALP试剂盒、钙试剂盒测定细胞内碱性磷酸酶活性及每孔钙含量;成骨诱导30天后取预置盖玻片的1板细胞,做Von Kossa染色,计算每张玻片钙结节数。 结果 传3代大鼠骨髓间充质干细胞成脂诱导7天、14天、21天后分化为脂肪细胞的阳性率以及甘油三酯含量,实验组均高于对照组;成骨诱导8天、12天、16天后细胞内碱性磷酸酶活性测定以及钙含量测定,实验组均高于对照组,30天后矿化结节的形成,实验组高于对照组。 结论 随着培养条件不同,成骨生长肽可促进大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞或成骨细胞分化。
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