棘托竹荪菌盖多糖分离制备及生物活性研究

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棘托竹荪(Dictyophora echinovolvata Zang, Zheng et Hu)属于担子菌亚门、腹菌纲、鬼笔目、鬼笔科、竹荪属,自古以来就是珍贵的药食两用真菌。棘托竹荪具有抗炎、抑制癌细胞发展、降低高血压和胆固醇、调节免疫作用、抗氧化和良好的抑菌作用。多糖是重要的具有生物学活性的天然高分子化合物之一,在自然界分布极为广泛,具有可同核酸与蛋白质相比拟的信息功能。目前对棘托竹荪菌盖多糖(DEVP)的研究很少,而且不够深入。本论文对DEVP进行了较系统的研究,包括提取条件优化、分离纯化、抗氧化活性、抑菌活性等方面。研究结果如下:1)棘托竹荪菌盖多糖提取条件研究采用热水浸提、乙醇沉淀的方法提取获得了棘托竹荪菌盖多糖。选取提取温度、料液比、提取时间、提取次数4个因素分别进行单因素实验,在单因素实验基础上,选择提取温度、料液比、提取时间及提取次数进行四因素三水平的Box-Behnken实验(BBD),对此4个影响因子的实验组和进行优化。得出棘托竹荪菌盖多糖的最优提取条件为提取温度为95℃,料液比为1:39,提取次数为3次,提取时间为3.5h。选用优化的实验数据,进行验证,结果表明实验值与模型的预测值基本一致,表明最优实验条件是切实可行的。2)棘托竹荪菌盖多糖分离纯化根据响应优化实验结果,采用热水浸提、乙醇沉淀、Sevage法脱蛋白、脱色、透析等方法提取获得了棘托竹荪菌盖精制多糖。采用DEAE-52纤维素柱层析对DEVP精制品进行初步分离,得到DEVP-A、 DEVP-B、DEVP-C、DEVP-D、DEVP-E五个组分。五个组分再经葡聚糖凝胶柱层析进一步分离,得到DEVP-1和DEVP-2两个均一多糖。采用比旋光度法纯度鉴定验证DEVP-1和DEVP-2为均一多糖组分。3)棘突竹荪菌盖多糖抗氧化活性运用化学方法测定的棘托竹荪菌盖多糖的体外抗氧化活性。测定结果表明,棘托竹荪菌盖多糖具有明显的还原能力,对超氧阴离子自由基、(DPPH·)有机自由基、羟自由基均表现良好的清除能力,随着多糖浓度的增加,还原能力及三种自由基的清除能力也相应增加,且在一定的浓度范围内,呈现一定的量效关系,尤其对羟自由基的清除方面,表现更为优异。总之,棘托竹荪多糖具有良好的还原能力和自由基清除能力,是一种抗氧化活性很高的物质。4)棘托竹荪菌盖多糖抑菌活性采用滤纸片法,选取酵母菌、青霉菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌和大肠杆菌为实验菌,对棘托竹荪菌盖精制多糖DEVP-A、DEVP-B、DEVP-C、DEVP-D、 DEVP-E等棘托竹荪菌盖多糖相关组分测定与评价其抑菌效力。测定结果表明,棘托竹荪菌盖精制多糖、DEVP-A、DEVP-B、DEVP-C、 DEVP-D、DEVP-E等都表现出一定的抑菌效力,对酵母菌、青霉菌、白色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌和大肠杆菌均有一定的抑制作用,且抑菌圈直径随着多糖浓度的增加而增大。在浓度为100mg/mL时,抑菌圈直径平均值为8mm左右。
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