蒲参胶囊由蒲黄、何首乌、赤芍等八味中药组成,现行工艺产品存在易吸湿、质量控制不完善等问题。本课题应用现代科学技术对蒲参胶囊生产工艺进行了优化研究,并对质量标准进行了提升研究。研究内容主要包括文献研究、工艺优化研究、质量标准提升研究和稳定性研究。一、文献研究以中医药理论为指导,阐述了蒲参胶囊方解,从药理、毒理、临床等方面对蒲参胶囊安全性、有效性等进行了归纳与总结;从理化性质、药理药效等方面对处方中蒲黄、何首乌等8味药材进行了归纳和总结。二、工艺优化研究原生产工艺为何首乌粉碎成细粉;蒲黄、赤芍、丹参等7味药材加水煎煮2次、提取液浓缩至稠膏后与何首乌粉末混匀,干燥后粉碎成细粉,加糊精制粒、干燥后填充胶囊。蒲黄、川芎、赤芍等药材中含有挥发油,原工艺未进行挥发油提取,何首乌打粉入药,成型辅料空间较小等,根据处方药物有效成分性质,设计工艺路线并进行研究,同时将优选工艺与原工艺进行比较。1、提取工艺研究(1)根据药材药用成分性质,以挥发油提取率为指标对蒲黄、川芎、赤芍等药材中挥发油进行了提取研究,以浸泡时间、加水量、提取时间为因素运用正交设计考察不同因素水平对挥发油提取的影响,确定挥发油提取工艺为:加6倍量水,浸泡1h,提取3h。该条件下挥发油提取率达80%以上,而原工艺未对挥发油进行提取保留。(2)药渣以芍药苷提取率为指标以溶剂倍数、提取时间、提取次数为因素运用正交设计进行了提取工艺研究,确定提取工艺为:加入7倍量水提取1.0h,滤过,药渣再加入5倍量水提取0.5h。优选后工艺药渣中芍药苷提取率约为30%。对优化前后提取工艺进行了比较,优化前后芍药苷总提取率分别为67.2%、91.2%。(3)对山楂、丹参、何首乌三味药材以总黄酮、二苯乙烯苷提取率为指标,以乙醇浓度、提取次数、加醇量、提取时间为因素进行正交考察,结果确定提取工艺为:加12倍量80%乙醇加热提取1.5h,滤过,药渣加7倍量80%乙醇加热提取1.0h,滤过,药渣加7倍量80%乙醇加热提取0.5h。该条件下总黄酮提取率约为94%,二苯乙烯苷提取率约为95%。2、浓缩、纯化工艺研究(1)对提取工艺(2)中水提液以芍药苷为指标进行了浓缩、醇沉考察,确定提取液采用减压法浓缩至相对密度1.15～1.20,醇沉浓度为70%。对优化前后浓缩工艺进行了比较,芍药苷转移率分别为97.5%、96.6%。(2)对提取工艺(3)中提取液以二苯乙烯苷转移率为指标进行了浓缩方式、浓缩温度考察,结果优选60℃减压浓缩。二苯乙烯苷转移率约为97%;对浓缩液以二苯乙烯苷、总黄酮转移率、浸膏得率为指标进行了除杂考察,确定除杂工艺为:加入浓缩液体积16%的1%ZTC B溶液絮凝除杂,再加入8%的1%ZTCA溶液絮凝。该条件下,浸膏得率由原来的23%降低至14%,而二苯乙烯苷、总黄酮转移率均在99%左右。3、干燥工艺研究(1)对浓缩、纯化工艺(1)药液浓缩后以芍药苷含量为指标进行干燥方法考察,比较鼓风干燥与真空干燥,结果所得浸膏中含量无明显差异,确定采用真空干燥法。(2)对浓缩、纯化工艺(2)中除杂后液体以干燥后浸膏粉中二苯乙烯苷含量为指标进行了干燥工艺考察,结果选择喷雾干燥法。对优化前后干燥工艺进行对比,二苯乙烯苷转移率分别为99.3%、98.8%。4、成型工艺研究(1)对提取工艺研究(1)中挥发油进行了β-环糊精包合和无机盐吸附研究,结果选择用挥发油2倍量二氧化硅吸附,根据挥发油提取率,确定每1个处加入二氧化硅10g。(2)将干燥工艺(1)、(2)中浸膏粉混合均匀,以颗粒性状、流动性、吸湿性以及成品崩解时限等为指标进行处方筛选及成型研究,确定每1000粒处方成型工艺为:取水提、醇提浸膏粉混匀,加入混合浸膏总重量的乳糖C80,混匀;取浸膏辅料总量5%的PVPK30,用80%乙醇液制成10%PVPK30溶液,加入混合浸膏辅料中,24目筛制粒,颗粒60℃干燥,20目筛整粒;取二氧化硅10g吸附挥发油后与颗粒混匀。对优化前后产品在辅料空间、流动性、吸湿性上进行比较,结果优化后产品辅料空间、休止角、临界湿度分别为50～55%、30°、75%,而优化前产品分别为4～8%、35°、50%。三质量标准提升研究原质量标准中除常规胶囊剂检查项外,有何首乌、丹参、川芎、党参等薄层鉴别和大黄素含量测定。质量标准提升中改进了何首乌、丹参(原儿茶醛)、川芎、党参薄层鉴别,增加了丹参中丹参酮|| A薄层鉴别,增加了成品溶出度检查,含量测定除原标准大黄素测定外增加了芍药苷、二苯乙烯苷含量测定。增加了原料、中间体、成品指纹图谱研究。1、薄层鉴别研究(1)何首乌薄层鉴别中,提取溶剂由二氯甲烷代替一级有毒试剂氯仿,优化前、后工艺成品均在与对照药材、对照品相应的位置上显黄色斑点,置氨蒸汽中熏后斑点变为暗红色,优化后成品斑点较优化前斑点多。(2)丹参鉴别项中检查原儿茶醛,将展开剂中二氯甲烷代替一级有毒试剂氯仿,优化前后成品均在与对照品相应的位置上显斑点,但优化后成品斑点较优化前清晰。(3)丹参鉴别项中检查丹参酮|| A,提取溶剂使用二氯甲烷,优化前、后产品进行了比较,结果优化后产品在与丹参酮|| A相应的位置上显相同颜色的暗红色斑点,而优化前产品未出斑点。(4)川芎薄层鉴别中,提取溶剂由二氯甲烷代替一级有毒试剂氯仿,优化前、后产品均在与对照药材相应的位置上显相同颜色斑点,但优化后产品荧光斑点较优化前产品强。(5)党参薄层鉴别中,提取溶剂山二氯甲烷代替.级有毒试剂氯仿,优化前、后工艺产品均在与对照药材相应的位置上显相同斑点,但优化后产品斑点较优化前多,且分离效果较好。2、溶出度检查以芍药苷、二苯乙烯苷溶出率为指标,考察了溶出介质、溶出方法、溶出转速等,结果确定取蒲参胶囊置250mL 0.5%吐温80溶液中,调节转速50rpm于37℃进行溶出度检查。对优化后产品以芍药苷、二苯乙烯苷累积溶出率为纵坐标,以时间为横坐标绘制了溶出曲线,并计算出芍药苷、二苯乙烯苷溶出参数T50、Td、m,优化后产品芍药苷溶出参数分别为7.14min、8.58min、2.14,而二苯乙烯苷溶出参数分别为8.00min、9.70min、1.90。对优化前后产品于45min取样进行溶出度检查比较,结果优化前后产品芍药苷溶出率分别为97.1%、99.2%,二苯乙烯苷溶出率分别为37.2%、97.6%。3含量测定(1)增加了芍药苷、二苯乙烯苷含量测定,以梯度洗脱、不同时间段设置不同波长进行了线性、精密度、溶液稳定性、重复性、加样回收等相关方法学研究,结果该方法切实可行,确定的液相条件能较好的测定工艺中两种有效成分的含量。将优化前后样品进行含量测定比较,结果优化前后芍药苷含量分别为0.63mg/粒、1.02mg/粒,优化前后二苯乙烯苷含量分别为1.30mg/粒、1.23mg/粒。(2)采用原质量标准含量测定方法对大黄素进行了测定,并对优化前后样品进行了含量比较,结果优化前后大黄素含量分别为131μg/粒、87.5μg/粒。4 指纹图谱(1)建立了原料(蒲黄、何首乌、丹参、赤芍、川芎)指纹图谱,进行了精密度、溶液稳定性、重复性等方法学考察,结果该方法切实可行。建立了指纹图谱共有模式,蒲黄、丹参、赤芍、川芎指纹图谱相似度均达0.9以上,何首乌指纹图谱相似度达0.8以上。(2)建立了中间体(水提中间体、醇提中间体)指纹图谱,进行了精密度、溶液稳定性、重复性等方法学考察,结果该方法切实可行。建立了指纹图谱共有模式,水提中间体、醇提中间体指纹图谱相似度均达0.9以上。(3)建立了成品指纹图谱,进行了精密度、溶液稳定性、重复性等方法学考察,结果该方法切实可行。建立了指纹图谱共有模式,成品指纹图谱相似度均达0.9以上。四稳定性研究参照建立的质量标准、中华人民共和国药典2010版及相关指导原则,样品于长期稳定性条件(25℃±2℃、RH60%±10%)、加速稳定性条件(40±2℃,RH 75%±5%)下贮存,长期稳定性于0个月、3个月、6个月记录考察结果,加速稳定性试验于0个月、1个月、2个月、3个月、6个月记录考察,结果表明各项指标在长期稳定性条件和加速稳定性条件下放置6个月内均未发生明显的变化,说明在考察期间内,优化后产品稳定。五特色与创新1在成型工艺中运用了新型辅料乳糖C80替代原赋形剂糊精,解决了产品易吸湿、生产环境要求高等问题,又保证了产品的溶出。2含量测定项增加了二苯乙烯苷、芍药苷的含量测定,在测定时采用了梯度流动相、不同时间段设置不同波长,解决了不同成分不同吸收波长在同一个条件下的检测问题。