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目的:在结直肠癌标本中检测ANKHD1的表达,分析ANKHD1表达与结直肠癌患者临床病理特征之间的关系。探讨ANKHD1对结直肠癌生物学功能的影响。研究YAP1在ANKHD1影响结直癌进展中的作用。方法:1.收集136例苏州大学附属第二医院2009-2014年,未进行放化疗的手术切除的结直肠癌患者标本。免疫组化检测患者肿瘤组织中ANKHD1的表达情况,并统计学分析ANKHD1表达和临床病理特点的相关性。2.采用慢病毒感染的方法构建稳定下调ANKHD1表达的结直肠癌细胞株,并采用免疫印迹实验(western blot)和实时定量PCR(real-time PCR)的方法验证感染效率。3.采用CCK8实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测ANKHD1沉默后结直肠癌细胞的增殖、侵袭转移能力及凋亡的变化。4.Western blot和real-time PCR实验用来检测ANKHD1沉默后YAP1和EMT相关蛋白的表达情况。5.利用balb/c小鼠采取皮下荷瘤的方法接种成瘤,观察ANKHD1沉默对体内肿瘤生长的影响。6.利用balb/c小鼠建立肿瘤转移模型,6周终止实验,取出小鼠主要脏器,通过肉眼观察和HE染色观察肿瘤转移情况,进一步研究ANKHD1在体内对肿瘤侵袭转移能力的影响。7.在ANKHD1沉默细胞中采用瞬时转染的方法转染过表达YAP1的质粒,并用Western blot法检测转染效率。8.CCK8实验、Transwell实验和Western blot实验分别用来检测过表达YAP 1后ANKHD1沉默细胞株的增殖、侵袭转移的能力及EMT相关蛋白的表达情况。结果:1.通过免疫组化检测136例结直肠癌标本中ANKHD1的表达情况,发现结直肠癌中ANKHD1的表达与肿瘤的浸润深度呈正相关,ANKHD1表达越高,肿瘤浸润越深,具有显著的统计学意义。2.通过慢病毒感染成功构建了稳定下调ANKHD1表达的结直肠癌细胞株HCT116和SW480,与对照组细胞相比,ANKHD1沉默组细胞在蛋白水平和RNA水平均有显著的下调表达。3.CCK8实验显示,在结直肠癌细胞HCT116和SW480中下调ANKHD1的表达会抑制细胞的增殖能力;Transwell实验显示,下调ANKHD1的表达会抑制结直肠癌细胞的侵袭转移能力;流式细胞术显示ANKHD1沉默并不显著改变结直肠癌细胞的凋亡水平。4.Westem blot实验显示,ANKHD1沉默显著抑制结直肠癌细胞EMT的发生,抑制AKT信号的激活及Hippo信号通路中YAP1的活性。5.裸鼠成瘤实验表明ANKHD1沉默会抑制结直肠癌的体内生长;小鼠肿瘤转移模型显示,ANKHD1沉默抑制肿瘤的肺转移。6.CCK8实验、Transwell实验和Western blot实验显示,过表达YAP 1可以逆转ANKHD1沉默引起的对结直肠癌细胞的增殖和侵袭转移能力的抑制,且会逆转ANKHD1沉默引起的对结直肠癌细胞EMT发生的抑制。结论:结直肠癌中ANKHD1的表达与肿瘤的浸润深度相关。ANKHD1可促进结直肠癌细胞的增殖和侵袭转移能力。ANKHD1通过靶向作用于YAP1进而调控结直肠癌细胞中EMT的发生及AKT信号的激活。