【摘 要】
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目的:通过对X线照射后的大鼠腮腺组织中活性氧簇、炎症因子以及凋亡和增殖因子的检测,研究九节茶对大鼠腮腺放射性损伤的防护作用及其可能的机制。方法:（1）实验动物模型的建立:将120只雄性大鼠随机分成5组:空白对照组（对照组）,单纯照射组（单照组）,低、中、高剂量九节茶加照射组（低、中、高剂量药物组）,每组24只;低、中、高剂量药物组（分别对应6.7、13.4、26.8g生药材/kg/d）大鼠于照射前
【基金项目】
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项目名称:壮药复方九节茶颗粒抗放射性损伤研究的开发,项目合同编号:桂科合1599005-2-11,项目来源:国家自然科学基金,项目起止时间:2015年-2017年
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目的:通过对X线照射后的大鼠腮腺组织中活性氧簇、炎症因子以及凋亡和增殖因子的检测,研究九节茶对大鼠腮腺放射性损伤的防护作用及其可能的机制。方法:（1）实验动物模型的建立:将120只雄性大鼠随机分成5组:空白对照组（对照组）,单纯照射组（单照组）,低、中、高剂量九节茶加照射组（低、中、高剂量药物组）,每组24只;低、中、高剂量药物组（分别对应6.7、13.4、26.8g生药材/kg/d）大鼠于照射前一周开始灌喂相应剂量的九节茶,直至观察结束,照射方式为全麻状态下给予单次15 Gy X线照射腮腺组织;单照组在药物组给药的相应时间内给予等量的生理盐水,照射方式同药物组;对照组则仅灌喂等量的生理盐水,不做其他干预;各组分别在照射后第10d、40d、70d随机抓取8只大鼠,腹腔麻醉后经腹主动脉取血并摘取腮腺组织进行下一步检测;（2）采用酶联免疫吸附试验（ELISA）技术对各组大鼠血清中活性氧簇（ROS）的量进行检测;用苏木精—伊红（HE）染色法和透射电镜观察腮腺细胞的病理学改变及其超微结构的变化;应用免疫组织化学法检测腮腺组织中TNF-α、PCNA、Bcl-2、Bax的表达水平,并用TUNEL检测腮腺细胞的增殖和凋亡情况。结果:（1）成功建立起九节茶干预下的腮腺放射性损伤实验动物模型;（2）在同一时间点,单照组中ROS的含量和TNF-α的表达较空白组明显升高（P<0.05）,而各药物组的上述观察指标介于二者之间,其中高剂量药物组低于低剂量药物组（P<0.05）;空白组腮腺组织结构完好;单照组腮腺组织受照射后10 d出现充血、水肿、炎症细胞浸润,之后40 d时组织纤维化加重,而同期的各药物组与单照组相比,各药物组腮腺组织的炎症反应明显减轻,且与药物剂量呈负相关。各时间段空白组腮腺细胞的超微结构正常。单照组细胞中只有极少量的分泌颗粒,大量溶酶体出现,粗面内质网结构被破坏,细胞核中的染色质固缩分散在核膜上,呈致密大团块状,且细胞核形状极不规则,核仁被挤到核膜边缘。高剂量药物组腮腺细胞中分泌颗粒明显高于单照组,但数量未达到正常水平,细胞核中的染色质均匀分散在核膜上,细胞核基本呈圆形;低、中剂量药物组的细胞损坏程度介于单照组和高剂量药物组之间。免疫组化结果显示,在照射后,与空白组相比,受射线照射的各组的PCNA表达水平均有明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。照射后10天和40天时,加用中、高剂量九节茶干预组PCNA的表达水平明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）,且照射后40天时,高剂量较低剂量九节茶药物组效果更明显,差异有统计学意义（P<0.05）。与空白组相比,单照组的Bcl-2表达水平均有明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。照射后10天和70天,加用九节茶干预组Bcl-2的表达水平较单照组明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。单照组中,Bcl-2表达水平呈现出随时间延长而递减的趋势。与空白组相比,单照组的Bax表达水平均有明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。照射后10天和70天,加用九节茶干预组Bax的表达水平较单照组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。单照组中,Bax表达水平呈现出随时间延长而递增的趋势。在照射后10 d和40 d时,TUNEL染色结果显示辐射后大鼠腮腺中表示凋亡的阳性细胞的平均吸光度（A）明显较空白组增加,差异有统计学意义（P<0.05）。而10 d组中加用高剂量九节茶干预组的阳性细胞平均吸光度（A）明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）,且40 d组中高剂量较低剂量九节茶效果更明显,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）腮腺组织经单次15Gy X射线腹面单前野垂直照射可成功建立大鼠腮腺放射性损伤模型;（2）九节茶通过清除放射后产生的ROS以减轻腮腺的炎症反应;（3）九节茶抑制腮腺细胞放疗后细胞凋亡的作用,可能是通过抑制Bax的表达,同时提高Bcl-2的表达来实现;（4）九节茶可能通过抑制腮腺细胞的过度凋亡和促进腮腺细胞的增殖修复来发挥防护腮腺放射性损伤的作用。
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