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[目的]探讨健脾消积方水提物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡、自噬的影响。采用全基因组表达谱芯片技术、系统药理学研究健脾消积方水提物抑制肝癌细胞增殖作用的靶基因,筛选出健脾消积方水提物调节肝癌自噬的关键化合物并揭示其作用机制。[方法]首先采用Cel1Titer GLO法检测不同浓度健脾消积方水提物作用下人肝癌SMMC-7721细胞的抑制率,计算半数抑制浓度(half-inhibitor y concentration,IC50);以不同浓度(1200ug/ml,1500ug/ml)健脾消积方水提物作用于肝癌SMMC-7721细胞,以等量未处理培养基培养的肝癌SMM C-7721细胞为对照组,作用48小时后,采用CellTiter GLO法、细胞克隆形成实验、流式细胞实验检测健脾消积方水提物对肝癌SMMC-7721细胞的增殖和凋亡的影响。以1500ug/ml健脾消积方水提物作用于肝癌SMC7721细胞,以等量未处理培养基培养的肝癌SMMC-7721细胞为对照组,分别干预人肝癌SMMC-7721细胞48小时后,(1)采用免疫印迹检测自噬相关蛋白LC3A/B、P62的表达,通过慢病毒介导的SensGFP-StubRFP-LC3融合蛋白检测自噬流。(2)提取人肝癌SMC7721细胞的总RNA,利用基因芯片技术,研究干预前后的差异基因,高内涵细胞功能学筛选(HCS)实验选择增殖抑制明显的基因,最终确定关键基因,验证其对肝癌细胞的作用。基于IPA通路分析,观察经健脾消积方干预后,自噬相关通路改变的情况。(3)以 TCMSP(http://lsp.nwsuaf.edu.cn/tcmspsearch.php)、TCMID(h ttp://l 19.3.41.228/tcmid/)、ETCM(http://www.nrc.ac.cn:9090/ETCM)等数据库为基础,基于 ADME(Absorption 吸收,Distribution 分布,Metabolism 代谢,Excretion排泄)对健脾消积方进行网络药理学分析,筛选出健脾消积方水提物调节肝癌的活性物质,作用靶点及相关通路。[结果](1)健脾消积方水提物对肝癌SMMC-7721细胞IC50为1500ug/ml。(2)不同浓度(1200ug/ml,1500ug/ml)健脾消积方水提物干预人肝癌SMMC-7721细胞48小时后,与对照组相比,健脾消积方水提物干预组肝癌细胞增殖明显受到抑制,克隆数减少,凋亡率增多。(3)自噬相关蛋白检测和自噬流监控表明结果显示,与对照组相比,1500ug/ml健脾消积方水提物组自噬标志蛋白LC3II/LC3I 比值增加,P62表达上调,自噬流受到抑制(P<0.01)。(4)基因芯片结果显示,与对照组相比,健脾消积方水提物干预组共有430个差异基因,其中上调基因265个和下调基因165个,从中选择选出未见报道与肝癌发生相关的,并且表达丰度高的癌基因,进行HCS筛选,结果显示,HIST1H2BK为增殖相关的阳性基因,干扰人肝癌SMMC-7721细胞HIST1H2BK基因结果显示,HIST1H2BK基因下调对细胞增殖凋亡有影响。基于IPA通路分析在影响自噬的通路中,ERK/MAPK通路被显著抑制。(5)根据TCMSP数据库以及Genecards数据库,“成分靶点”、“肝癌靶点”做映射取交集,筛选出45个化合物,Metascape富集分析结果显示,活性靶点中有多个靶点在不同生物学过程和通路中被富集,其中最显著的就是癌症、细胞迁移等生物学过程,KEGG通路富集分析结果显示,活性靶点在乙肝、肝炎、炎症、和凋亡通路也被显著富集。槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇、刺槐素、山奈酚是调控肝癌细胞增殖的主要化合物,在健脾消积方防治肝癌中起到关键作用,健脾消积方对凋亡及MAPK、PI3K-Akt自噬相关通路有较高的显著性和基因富集水平。[结论]1、健脾消积方水提物对人肝癌SMMC-7721细胞具有增殖抑制效应,能够诱导其凋亡。2、健脾消积方水提物能够通过抑制自噬体向自噬溶酶体的流动调控人肝癌SMMC-7721细胞自噬过程。3、健脾消积方调控肝癌细胞增殖抑制过程的关键基因为HIST1H2BK基因,作用机制可能是通过影响ERK/MAPK通路发挥对细胞自噬的调控作用,抑制肝癌细胞增殖、诱导其凋亡。4、槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇、刺槐素、山奈酚是健脾消积方当中调控肝癌细胞自噬过程的主要活性成分。作用机制可能是通过影响ERK/MAPK通路发挥对细胞自噬的调控作用,抑制肝癌细胞增殖、诱导其凋亡。