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人血清白蛋白(human serum albumin，HSA)占人血浆总蛋白的60%，具有抗凝血、清除自由基、维持血液正常的渗透压等功能，广泛用于抗休克与治疗烧伤、手术或意外大出血造成的急性血容量减少。目前市售HSA均来源于人源血浆的提纯，存在产量不足以及纯化过程难以避免血源病毒两大问题。因此，利用基因工程技术来生产重组人血清白蛋白(recombinant HSA，rHSA)代替人源HSA已经成为一种趋势。目前的难点主要集中于提高rHSA的表达水平及其纯度。本文针对毕赤酵母(Pichia pastoris)在表达rHSA过程中常用的载体-菌株组合及不同规模下影响蛋白表达水平的条件进行了初步优化试验研究。本文研究不同载体-菌株组合对rHSA表达水平的影响时发现：在表达rHSA时，pPICZα系列载体作为表达载体；而选用X-33菌株的rHSA表达水平要优于GS115和SMD1168菌株，说明选用X-33作为宿主菌有利于提高rHSA的表达量。本文研究1L摇瓶规模下不同因素对rHSA表达水平的影响时发现，不同装液量、转速、温度、pH、甲醇浓度和添加次数以及不同离子对rHSA表达水平均有影响。最佳表达条件为1L三角瓶中装入100mLBMGY培养基，接种量1%，转速200rpm，pH=5.5，温度22℃，甲醇每24h添加2次，每次添加量为总体积的1%，磷酸盐浓度100mM/L，硫酸铵浓度0.5%。最佳表达条件下，诱导240h后rHSA的表达量可达到0.5g/L。此一系列条件可以作为发酵罐规模培养条件的参考。本文研究3L发酵罐规模下不同因素对rHSA表达水平的影响时发现，不同的基础盐培养基、起始诱导密度、溶解氧体积分数(DO)、pH、温度、甲醇浓度等培养条件以及诱导过程中添加额外碳源、油酸等影响因素对rHSA表达水平均有影响。最佳表达条件为一级种子以10%的接种量接入基础盐培养基中，起始诱导密度为400，发酵过程中保持DO在30%，诱导温度22℃，pH=5.75，甲醇电极控制甲醇浓度在1%，诱导过程中添加甘油2g/L/h，油酸添加量为0.1%，发酵全过程由发酵罐控制系统软件进行在线控制和数据采集。最佳表达条件下，诱导288h后rHSA表达量接近5g/L。