南海特色海藻多糖的提取及生物活性研究

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海藻多糖是由海藻中提取的一种功能大分子,具有抗肿瘤、抗病毒、增强机体免疫、降血糖、降血脂、抗凝血等多种生物学活性,是极有潜力的药用资源,有望在人类治疗癌症、艾滋病、心脑血管疾病等顽症方面发挥重要作用。南海海藻资源优质丰富,是研究和开发海藻多糖的资源宝库。本论文旨在对4种南海特色海藻进行多糖的提取及生物活性研究,以期为南海特色海藻多糖的开发应用提供相关的理论指导。本文选取细基江蓠繁枝变型(细江蓠)、浒苔、斜基马尾藻、灰叶马尾藻4种南海特色海藻为研究对象,用不同浓度的NaOH溶液对4种海藻多糖进行浸提。采超声辅助提取方法和传统水提法,通过单因素实验和正交实验,考察得出各种海藻多糖的最佳提取条件。然后用Sevage法脱蛋白,用DEAE-32纤维素离子交换柱层析和葡聚糖凝胶层析进行分级,得到海藻多糖。细江篱多糖GTS最高产率为12.98%;浒苔多糖EPS最高产率为3.71%;斜基马尾藻多糖SAS最高产率为15.71%;灰叶马尾藻多糖SCS最高产率为13.4%。用GPC检测海藻多糖的分子量,GTS、EPS、SAS和SCS的数均分子量分别约为42kD、50kD、98kD和36kD。用元素分析仪来测试海藻多糖分子中C、H、O、 N、S的个数比,几种多糖分子中C、H、O个数比均约为1:2:1,符合C(H20)n多糖分子通式,且几种分子中都含有少量N、S。用ICP-MS分析海藻多糖分子中金属离子含量,金属离子含量低,有害重金属Cu、As、Cd、 Cr含量极其微量,仅有几个ppb,Hg、Pb含量更是低于仪器的检测限。通过红外测试分析海藻多糖分子的结构信息。对所得到的各种海藻多糖的含蛋白和不含蛋白纯多糖进行生物活性对比测试。用电子自旋共振技术(ESR)研究其抗氧化活性;通过多糖对人前髓白细胞(HL60)生长的抑制作用来检测其抗癌活性;通过测试不同质量浓度的海藻多糖对人血浆凝结时间的影响,来检测其抗凝血活性。结果显示大部分样品有很明显抗氧化活性和对HL60细胞有强的抑制活性,斜基马尾藻多糖SAS对人血浆的凝血时间影响非常明显。10mg/mL碱提灰叶马尾藻多糖SCS1样品对羟基自由基的清除作用最高能达到87.2%。水提的浒苔多糖EPS2对HL60细胞的抑制活性在接触细胞24h时开始显现,在72h达到最高43.2%。碱提斜基马尾藻多糖SAS4能使人血浆的活化部分凝血活酶时间(APTT)延迟110.1s、凝血酶时间(TT)延迟104.6s。
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