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多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的发生发展是通过一系列连续、相关的步骤,如渐进性的基因失调。为了寻找多发性骨髓瘤发病相关的新基因,石奕武博士等利用基因芯片分析了MM患者与正常人骨髓单个核细胞的基因表达谱,显示DAZAP2(Deleted inazoospermia associated protein 2)基因表达明显下调。在MM患者与正常人骨髓单个核细胞中,通过半定量RT-PCR和Western blot检测,又进一步证明DAZAP2基因的低表达。上述结果表明表达下调的DAZAP2基因可能在MM的发病机制中起到关键的作用。为了阐明在MM中表达下调的DAZAP2基因的表观遗传学机制,我们应用亚硫酸盐-基因组测序法(BGS)确定了KM3细胞系中DAZAP2基因启动子的甲基化状态,并获得了详细的甲基化位点。我们应用生物信息学分析了DAZAP2基因-632至+58序列,在该区域发现了两个CpG岛。我们采用亚硫酸盐-测序性PCR(BSP)分别扩增了DAZAP2基因的两个CpG岛。5次单独的亚硫酸盐处理后测序结果与正常DAZAP2序列比较后表明,这两个区域呈现出高密度的甲基化位点。两个CpG岛的总甲基化CpG位点比率达到了46.25%。然后,我们应用TFSEARCH软件分析了DAZAP2启动子,发现了一些转录因子结合序列,这些因子有p300、ADRI、CREB和AP-2等。有些甲基化CpG位点恰好位于这些转录因子结合序列上。我们推测这种CpG位点甲基化模式可能通过干扰转录因子与启动子的结合,从而导致DAZAP2的转录抑制。然而,我们需要采取进一步实验例如EMSA来证实这种假说。我们研究了CpG位点甲基化模式在体外是否也能抑制基因表达,同时找到DAZAP2基因启动子的核心核苷酸序列。我们应用PCR分别扩增了位于DAZAP2基因启动子区的两个CpG岛。分别将三段核苷酸序列插入至荧光素酶报告基因载体(pGL2-Basic vector),同时将这三段核苷酸序列用M.SssⅠ甲基化酶处理后连接到pGL2-Basic载体上。将构建好的重组质粒转染COS-7细胞,检测荧光素酶的表达活性。结果显示序列1表现出较弱的转录活性,序列2和序列3都表现出显著的活性,经过甲基化处理的序列其转录活性明显受到抑制。上述结果表明含有第二个CpG岛的序列2可能是DAZAP2基因启动子的关键性核苷酸序列。我们还证实CpG位点甲基化模式能抑制基因表达。所有实验结果表明启动子中甲基化的CpG位点在多发性骨髓瘤中DAZAP2基因的表达下调起到了关键性作用。通过DAZAP2启动子甲基化机制的表观遗传学沉默可能是多发性骨髓瘤的发病机理中一个重要因素。