HINT2基因表达下调在结直肠癌细胞上皮细胞间质转化过程中的作用及其机制研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ktcargo147
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
【研究背景及目的】结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤,转移、复发是该病的主要死因,其转移机制已成为目前的研究热点。近年来,越来越多研究表明上皮细胞间质转化(EMT)对结直肠癌细胞侵袭、转移能力的增强发挥关键作用。Martin等学者研究表明,三联组氨酸结合蛋白2(Histidine triad nucleotide-binding 2,HINT2)对肿瘤组织的生长起抑制作用,且该蛋白可诱导肿瘤细胞凋亡。我们前期研究发现,结肠癌组织中HINT2表达量明显低于正常结肠组织,且HINT2对SW480结肠癌细胞的迁移、侵袭能力具有抑制作用。因此,本课题的目的是探究HINT2在结直肠癌细胞EMT中的作用,并探讨相关的分子机制。【实验方法】1.建立稳定沉默HINT2的SW480细胞系将结肠癌细胞系SW480感染重组慢病毒Hint2 sh RNA(h)Lentiviral Particles(sc-92707-V)的方法敲除HINT2,并用有限稀释克隆法建立稳定沉默细胞系。2.检测HINT2对SW480结肠癌细胞株EMT的影响2.1.利用慢病毒Hint2 sh RNA(h)Lentiviral Particles感染结直肠癌细胞株SW480,下调细胞株中HINT2表达,显微镜下观察细胞形态变化,利用Western blot方法检测HINT2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达量变化情况。2.2.构建包含E-cadherin启动子结合位点的报告基因质粒,转染入Hint2 shRNA(h)Lentiviral Particles、Control sh RNA Lentiviral Particles-A的SW480细胞株,通过检测荧光素酶表达水平预测HINT2对E-cadherin基因转录的调节作用。3.观察HINT2变化对SW480结直肠癌细胞株迁移及侵袭能力的影响用细胞划痕试验及Transwell试验检测不同HINT2表达水平对SW480细胞迁移、侵袭能力的影响。4.探讨HINT2抑制SW480细胞EMT的分子机制4.1.利用Real-time PCR检测下调HINT2表达对SW480细胞EMT相关转录因子SNAI1、SNAI2、ZEB1、ZEB2、TWIST1、TWIST2表达的影响。4.2.制备HINT2与ZEB1双干扰慢病毒HINT2+ZEB1 shRNA Lentiviral Particles。4.3.利用慢病毒Hint2 sh RNA(h)Lentiviral Particles、HINT2+ZEB1 sh RNA Lentiviral Particles或Control sh RNA Lentiviral Particles-A感染结肠癌细胞株SW480,利用Western blot方法检测HINT2、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达量变化情况。4.4.构建包含E-cadherin启动子结合位点的报告基因质粒,转染入Hint2 shRNA(h)Lentiviral Particles、HINT2+ZEB1 sh RNA Lentiviral Particles或Control sh RNA Lentiviral Particles-A的SW480细胞株,通过检测荧光素酶表达水平预测ZEB1在HINT2介导的E-cadherin基因转录调节中的作用。5.统计学分析釆用SPSS 22.0进行统计分析,所有的结果都以均数±标准差表示,采用t检验,P<0.05有统计学意义。【实验结果】1.成功建立低表达HINT2的SW480细胞系。2.在SW480细胞中小干扰HINT2后,细胞形态由浑圆变得细长,出现梭形触角,E-cadherin表达下降,N-cadherin、Vimentin表达量明显上升。3.荧光素酶报告基因试验结果显示HINT2通过转录水平促进E-cadherin表达。4.利用慢病毒载体下调HINT2表达后,细胞划痕试验及Transwell方法检测结果显示HINT2显著抑制SW480细胞的侵袭、迁移能力。5.在SW480细胞中同时干扰HINT2及ZEB1后,EMT分子标记物(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)表达量相较对照组无明显变化。荧光素酶报告基因试验结果显示在SW480细胞中同时干扰HINT2及ZEB1,E-cadherin启动子活性相较对照组未发生变化。【结论】1.HINT2可抑制SW480结直肠癌细胞的EMT。2.HINT2可正性调控SW480结直肠癌细胞E-cadherin的转录。3.HINT2可有效抑制结直肠癌细胞的迁移侵袭能力。4.ZEB1是低表达HINT2诱导结直肠癌细胞EMT所必需的。5.低表达HINT2对E-cadherin转录活性的负性调控依赖于ZEB1表达
其他文献
目的:观察女性乳腺癌中Erp57、ERAP1的表达情况,探讨其与乳腺癌各临床病理指标的关系。方法:收集新疆医科大学附属肿瘤医院石蜡包埋组织标本共148例(乳腺癌124例/纤维腺瘤24
高考英语复习既是对过往知识的梳理归纳,也是对学科知识的理解升华。为了能够更加有效地复习英语,教师应当帮助学生采取科学的复习策略,通过制定计划以保证效率,扎实基础以融
学校德育工作一直是学校教育的一个重要内容,学生思想品德的好坏直接影响到学校教育教学工作的正常开展。新课程标准也要求转变以前的“先教书再育人”为现在的“先育人再教书
目的探讨有无吸烟史肺癌患者的临床特点与近期疗效的差异。方法比较非吸烟肺癌(137例)及吸烟肺癌(321例)患者年龄、性别、病理类型、分期、治疗情况和近期疗效等方面的差异。结果
《钟形罩》和《无字》分别探讨东西方不同生活年代的女性尤其是女性知识分子的生存现状、心理状态及出路问题,意义深远。通过对这两部作品的女主人公进行比较分析,尤其是两者
本文利用溶剂热、溶胶-凝胶和共价嫁接技术制备了嵌入CdTe量子点和螺内酰胺结构罗丹明6G的磁性二氧化硅纳米微球,其具有明显的核壳结构、超顺磁性及好的Hg^2+比率荧光传感性
应用柱色谱技术从羊角拗[Strophanthus divaricatus(Lour.)Hook.et Arn.]根的甲醇提取物中分离纯化出6个化合物,通过1H NMR和13C NMR等波谱技术并对照文献,鉴定其分别为(+)-p
对青海干旱生境土壤链霉菌Streptomyces pactum KIB-HL8液体发酵,应用硅胶柱色谱和高效液相色谱等方法进行分离和纯化,得到5个化合物,并用MS、NMR等方法对其结构进行解析,分
近些年来许多只有普查勘探工作程度下的金属小矿床已经直接进入了开发阶段,但是因为这些矿山大都规模比较小并且地质工作程度也比较低,并且这些小矿床的开采大都是进行地下作
随着跨文化交际的发展,越来越多的中国文学作品被介绍到了西方。由于中西文化差异的存在,文学作品中文化负载词的英译一直是一个难点。为了解决这一问题,本文通过对多个中国