四种杨树组培和再生体系的建立

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杨树是我国速生丰产林的主栽树种。传统的杨树繁殖是利用扦插生根的方法,但在气候条件变化的大环境下,传统的育种和繁殖手段已不能满足当前的形势,杨树的抗性育种也显得极为迫切,而进行抗性育种的基础和关键点便是杨树高效的组培和再生体系的建立。组织培养作为一种新型的繁殖途径,可以有效的解决当前我国杨树育种以及快速造林的问题,是短时间内繁殖大量优良树种的首选途径。中金7号杨、小叶杨、抗虫2号杨、新疆杨的生长速度较快,适应性较好,但在抗性方面比较欠缺。通过遗传改良可以解决抗性方面的缺陷,而遗传改良的基础便是建立高效的组培和再生体系。本研究致力于中金7号杨、小叶杨、抗虫2号杨、新疆杨的组织培养,以适宜的培养基建立杨树叶片为外植体的再生体系,为研究杨树的转化体系提供材料,同时为抗逆杨树转基因育种奠定基础。本研究对中金7号杨、小叶杨、抗虫2号杨、新疆杨四种杨树的叶片、叶柄、茎段分别进行HgCl2消毒时间的筛选,筛选出最适宜的外植体和最佳的消毒时间。对生长良好的外植体分化芽扩繁、继代,得到大量的无菌植株。以无菌叶片为新的外植体,优化BA和NAA的浓度配比,获得最佳的分化培养基配方和诱导愈伤组织培养基的配方。选择生长的分化茅,调整IBA的浓度,获得最佳的生根培养基配方。得到的结果如下:(1)中金7号杨最适合组织培养的材料是叶柄,在75%的酒精溶液中消毒15s,0.1%HgCl2的溶液消毒7min,污染率为3.3%,出愈率达到96.7%。以无菌叶片为新的外植体,最佳的分化培养基为3号培养基(MS+0.5mg/LB A+0.5mg/LNAA),出愈率和分化率均可以达到88.4%。最佳的生根培养基为9号培养基(1/2MS+0.3mg/LIBA),生根率达93.3%。最佳的诱导愈伤培养基为11号(MS+0.5mg/LBA+1.0mg/LNAA),出愈率达到91.7%,3号培养基(MS+0.5mg/LBA+0.5mg/LNAA)效果次之,出愈率为88.4%。(2)小叶杨最适合组织培养的材料是叶柄,在75%的酒精溶液中消毒15s,0.1%HgCl2的溶液消毒7min,污染率为3.3%,出愈率达到95.0%。以无菌叶片为新外植体,最佳的分化培养基为6号培养基(MS+2.0mg/LB A+0.5mg/LN AA),出愈率和分化率分别为88.4%和86.4%。最佳的生根培养基为10号培养基(1/2MS+0.5mg/LIBA),生根率达96.7%。最佳的诱导愈伤培养基为11号(MS+0.5mg/LBA+1.0mg/LNAA)出愈率为88.4%,13号培养基(MS+1.0mg/LBA+1.0mg/LNAA)效果也不错,出愈率为76.7%。(3)抗虫2号杨最适合组织培养的材料是茎段和叶片,在75%的酒精溶液中消毒15s,0.1%HgCl2的溶液消毒7min,污染率均为15%.出愈率达到83.3%。以无菌叶片为新的外植体,最佳的分化培养基为2号培养基(MS+0.5mg/LBA+0.3mg/LNAA),出愈率和分化率分别为83.4%和82.7%;6号培养基(MS+2.0mg/LBA+0.5mg/LNAA)的效果次之,出愈率和分化率均为78.4%。最佳的生根培养基为10号(1/2MS+0.5mg/LIBA),生根率为100%。最佳的诱导愈伤培养基为13号培养基(MS+1.0mg/LBA+1.0mg/LNAA),出愈率为95.0%。(4)新疆杨最适合组织培养的材料是叶柄,在75%的酒精溶液中消毒10s,0.1%HgCl2的溶液消毒8min,污染率为10%,出愈率达到90%。以无菌叶片为新的外植体,最佳的分化培养基为3号培养基(MS+0.5mg/LBA+0.5mg/LNAA),出愈率为73.4%,分化率为72.8%。最佳的生根培养基为9号培养基(1/2MS+0.3mg/LIBA),生根率达93.3%。最佳的诱导愈伤培养基为3号培养基(MS+0.5mg/LBA+0.5mg/LNAA),出愈率为93.4%。
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