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研究目的肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)中存在着很多免疫分子,对肿瘤发生、侵袭、转移具有不同的作用。三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)由于其缺乏有效的治疗靶点,因而预后相较于其他乳腺癌类型更差,而免疫治疗是目前具有巨大潜力的治疗方式。因此,探明三阴性乳腺癌肿瘤微环境中各个免疫分子之间的相互作用及其作用机制十分必要。共济失调-毛细血管扩张突变基因(ataxia telangiectasia mutated,ATM)是在维持基因组遗传稳定性过程中发挥至关重要作用的激酶。当DNA发生双链断裂的情况时,ATM磷酸化包括p53和BRCA1/2在内的关键下游蛋白,从而调控涉及细胞周期阻滞、DNA修复、衰老和凋亡的复杂信号通路。有研究报道,ATM可以通过调节肿瘤微环境中的免疫分子来影响免疫反应,进而对患者的预后产生不同的影响。在本研究中,我们分析了ATM及其活化形式(Phosphorylate Ser1981)P-ATM,TNF家族细胞因子FASL/TRAIL,NKG2D的配体MICA,以及CD8,Ki-67和FOXP3在三阴性与非三阴性的淋巴细胞为主型乳腺癌(lymphocyte-predominant breast cancer,LPBC)中的表达差异,即肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor infiltrating lymphocytes,TILs)≥50%的乳腺癌病例。并分析了ATM表达与临床病理特征的相关性,来探究ATM对乳腺癌肿瘤微环境中免疫反应的作用。研究方法1.选取天津医科大学肿瘤医院乳腺病理研究室接收的194例LPBC病例,时间从2017年1月到2017年12月,根据免疫组化报告以及再次阅片后得到的结果,将其分为96例三阴性和98例非三阴性两组作为研究对象。2.采用免疫组织化学染色方法分析LPBC整体水平上及三阴性和非三阴性组内,ATM及其活化形式P-ATM的表达差异,并分析ATM、P-ATM各自表达与临床病理特征之间的相关性。3.分析三阴性和非三阴性组内,TNF家族的细胞因子FASL/TRAIL,NKG2D的配体MICA,FOXP3表达的差异;同时分析LPBC整体水平上以及三阴性和非三阴性组内,ATM与MICA、FASL/TRAIL表达的相关性。4.分析三阴性和非三阴性组内,CD8阳性的肿瘤浸润淋巴细胞数和Ki-67表达的差异。研究结果1.194例LPBC病例的免疫组织化学染色结果显示,总体上ATM的表达与肿瘤大小呈显著负相关(r_s=-0.404,P<0.001),同时ATM的表达与患者的淋巴结转移率也呈显著负相关(r_s=-0.254,P<0.001)。另外,ATM的表达与患者年龄、组织学分级、是否绝经以及恶性肿瘤家族史之间不存在显著的相关性,同时P-ATM的表达与LPBC患者的临床病理特征之间也无显著相关性。在三阴性分组中,ATM高表达的病例数要显著低于非三阴性分组中的病例数(?2=20.013,P<0.001),而P-ATM的表达在两组之间无显著差异。在整体水平上ATM与其活化形式P-ATM的表达呈正相关(r_s=0.159;P=0.027),这一情况同样出现在非三阴性分组中(r_s=0.253,P=0.012),但是在三阴性分组中却未发现ATM与P-ATM之间存在显著相关性。2.在194例LPBC中,MICA高表达73例,TRAIL高表达113例,FASL高表达75例。ATM和MICA呈显著正相关(r_s=0.174;P=0.016)。而ATM表达与TRAIL及FASL均呈显著负相关(r_s=-0.197;P=0.006;r_s=-0.259,P<0.001)。在三阴性组和非三阴性组中,ATM和FASL表达均呈显著负相关(r_s=-0.345,P=0.001;r_s=-0.226,P=0.008),而ATM和TRAIL及MICA之间并未检测到显著相关性。3.在194例LPBC中,三阴性组的MICA表达要明显低于非三阴性组(?2=15.133,P<0.001)。在三阴性组TRAIL的表达要明显高于非三阴性组。此外,三阴性组中FOXP3阳性调节性T细胞Tregs数量要明显高于非三阴性组(?2=9.18,P=0.002)。相较于非三阴性组,CD8阳性的细胞毒性T细胞数量在三阴性组中显著降低(P<0.01)。4.在194例LPBC中,三阴性组的Ki-67的表达要明显高于非三阴性组(P<0.0001)。而在LPBC病例整体水平上,ATM表达与Ki-67呈现出显著负相关(r_s=-0.142,P=0.048)。研究结论在三阴性的LPBC中,ATM可能通过调节肿瘤细胞表面NKG2D的配体MICA和TNF家族的细胞因子FASL/TRAIL来影响乳腺癌肿瘤微环境中肿瘤浸润淋巴细胞的功能,特别是细胞毒性T淋巴细胞CTL,进而影响肿瘤微环境中的免疫反应。总而言之,三阴性病例中ATM表达的下调可能与肿瘤免疫活性受损、肿瘤快速生长及侵袭性临床过程有关。这为三阴性乳腺癌的治疗和评估提供了新的思路。