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目的以人膀胱癌T24细胞为代表,体外研究石榴皮鞣质抗膀胱癌活性,同时对石榴皮鞣质主要单体成分（没食子酸、安石榴苷、鞣花酸、安石榴磷）抗癌活性进行比较,筛选出抗膀胱癌活性最强的石榴皮鞣质单体成分,进一步探讨其作用机理。本课题为鞣质类化合物抗癌研究及抗膀胱癌中药制剂的研发提供理论基础,有利于进一步开发利用鞣质类成分。方法（1）体外培养T24细胞,采用CCK-8实验测定石榴皮鞣质对T24细胞的抑制率并筛选给药浓度及作用时间,确定石榴皮鞣质给药浓度分别为12.5、25、50μg·mL-1,作用时间为24 h。观察给药后T24细胞形态及细胞核形态变化,PITC/PI染色流式细胞仪测定细胞凋亡率,JC-1染色检测线粒体膜电位（MMP）水平变化。（2）采用CCK-8实验,比较石榴皮鞣质的主要单体成分（没食子酸、安石榴苷、鞣花酸、安石榴磷）抗膀胱癌T24细胞活性,结果表明没食子酸抑制膀胱癌活性最好,后期均用没食子酸给药处理,并确定没食子酸给药浓度分别为6.25、12.5、25μg·mL-1,作用时间为24 h。观察没食子酸刺激后,观察T24细胞及细胞核形态变化,流式细胞术研究细胞凋亡率和细胞周期分布,DCFH-DA荧光探针测定活性氧（ROS）水平,JC-1染色检测MMP水平变化,Western blot法及Real-Time PCR法分别研究没食子酸对T24细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cyt-c和P53蛋白及基因表达水平的影响。（3）采用细胞划痕实验及transwell实验观察没食子酸对T24细胞迁移及侵袭的影响,Western blot法研究没食子酸刺激后,T24细胞内VEGF蛋白的表达结果（1）石榴皮鞣质以浓度-时间依赖性抑制T24细胞生长增殖,石榴皮鞣质刺激T24细胞24 h、48 h及72 h的IC50分别为72.70μg·mL-1、62.26μg·mL-1和19.64μg·mL-1。石榴皮鞣质刺激T24细胞后,细胞核皱缩变形,细胞呈凋亡状态。流式细胞仪证实石榴皮鞣质刺激24 h后,T24细胞MMP显著降低,凋亡细胞明显增多,主要诱导早期凋亡。（2）CCK-8实验结果表明石榴皮鞣质主要单体成分抑制膀胱癌T24细胞增殖活性从强到弱依次为:没食子酸、安石榴苷、安石榴磷、鞣花酸。没食子酸刺激T24细胞24 h的IC50为21.73μg·mL-1。流式细胞仪结果显示,没食子酸阻滞T24细胞周期于S期,诱导T24细胞凋亡,其中早期凋亡细胞数量显著增多。进一步研究发现没食子酸刺激后,T24细胞中活性氧ROS增加,MMP水平降低。Western blot从蛋白水平检测没食子酸刺激后,T24细胞内P53、Cyt-c及促凋亡蛋白Bax以浓度依赖关系上调,并激活Caspase-3蛋白,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,Bax/Bcl-2显著上升。Real-Time PCR实验结果表明没食子酸刺激后,T24细胞上调P53、Cyt-c、Caspase-3及Bax mRNA的表达,并下调Bcl-2 mRNA的表达。（3）细胞划痕实验、transwell实验证实没食子酸抑制T24细胞迁移及侵袭活性呈浓度依赖关系。Western blot实验表明没食子酸刺激后,T24细胞内VEGF蛋白表达量显著降低。结论石榴皮鞣质具有抑制膀胱癌T24细胞增殖并诱导其凋亡活性,石榴皮鞣质单体成分抗膀胱癌T24细胞活性最强的是没食子酸。没食子酸阻滞T24细胞周期于S期抑制细胞增殖、并诱导细胞凋亡、降低迁移及侵袭能力,其中没食子酸诱导T24细胞凋亡可能与ROS介导的线粒体凋亡途径相关。