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背景:外泌体(exosomes)是细胞自然分泌的直径为40-150 nm的小囊泡,因为其能够稳定地传递药物、治疗性microRNA以及蛋白质等,所以外泌体可以作为潜在的肿瘤靶向药物载体来治疗肿瘤。口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinomas,OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,目前已成为影响公众健康的重大问题之一,肿瘤抑制因子p53在肿瘤治疗中起着重要的作用,它被描述为“基因组的守护者”,它在防止基因突变以保存基因组稳定性方面至关重要,它的突变或缺失与人类所有癌症的发生密切相关,而p53功能的关键媒介miR-34a作为一种肿瘤抑制因子,可以与p53构成正反馈调控网络来抑制肿瘤细胞生长、转移及抑制肿瘤干细胞。目的:利用HEK293细胞分泌的外泌体(exosomes)来构建装载miRNA34a的exo-miRNA34a复合体,观察其对口腔鳞癌HN6细胞株增殖的影响。方法:提取培养HEK293细胞的上清液2000ml,利用100kd的50ml超滤离心管浓缩至50ml,利用超速离心法自浓缩的上清液中分离出外泌体,用PBS重悬后,100KD的1ml超滤离心管纯化,透射电子显微镜下观察外泌体大小及形态,免疫印迹实验检测外泌体表面蛋白;用绿色的亲脂性荧光染料PKH67标记外泌体,将其与红色荧光CY3标记的、胆固醇基修饰的miR-34a mimics共孵育,构建exo-miR34a复合体,并于倒置荧光显微镜下观察载药率。将exo-miRNA34a接种于口腔鳞癌细胞株HN6中,激光共聚焦显微镜观察其进入HN6细胞,CCK8检测载药后的HN6细胞生长特性。结果:1.透射电子显微镜下观察到外泌体为大小40-150nm的小囊泡;2.Western blot检测外泌体表面蛋白TSG101、CD63均有表达,Calnexin不表达,进一步证实外泌体的提取是成功的;3.倒置荧光显微镜下观察外泌体与miRNA34a mimics结合的载药率为47%,且载药前后外泌体形态数量分布未见明显改变;4.激光共聚焦显微镜下exo-miRNAa34a mimics可进入HN6细胞中;5.CCK-8细胞增殖实验检测可见exo-miRNA34a对HN6增殖与对照组相比具有明显抑制作用。结论:外泌体介导的miRNA34a mimics可明显抑制口腔鳞癌细胞的增殖。