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目的本课题通过观察散结消瘿方及温肾健脾方对自身免疫性甲状腺炎大鼠模型进行干预、治疗,深入探讨散结消瘿方及温肾健脾方对自身免疫性甲状腺炎的治疗作用,从细胞凋亡及免疫应答、细胞炎性因子方面进一步明确其发病机制,并从中医“痰瘀”及“脾肾亏虚”的角度来探讨自身免疫性甲状腺炎的中医病机,进一步加深对自身免疫性甲状腺炎免疫学发病机理及中医病机的认识,为其治疗提供新的思路。方法将健康的雌性Wistar大鼠90只,体重约120±20g,购回后适应性饲养1周,随机分为6组:正常组(G1):15只;模型组(G2):15只;雷公藤组(G3):15只;散结消瘿方组(G4):15只;温肾健脾方组(G5):15只;散结消瘿方及温肾健脾方联合治疗组(G6):15只。G1组给予普通饲料饲养;G2—G6组造模:将甲状腺球蛋白100mg完全溶解于双蒸水50ml中,取10ml与等体积完全弗化剂充分混合成油包水状,取0.5ml在背、腹腔、腿、颈全身等多点皮下注射作为初次免疫,第2周取甲状腺球蛋白10ml与不完全弗化剂10ml充分混合后作为加强免疫,以后每周一次,至第5周,期间配合高碘水(1L水中加入0.64g碘化钠配制)饮水喂养;第6周开始,G2组给予普通饲料及饮水饲养至9周;G3组给予雷公藤片1.08mg/kg.d灌胃至10周;G4组给予散结消瘿汤20g/kg.d灌胃至10周;G5组给予温肾健脾方组20g/kg.d灌胃至10周;G6组给予散结消瘿汤及温肾健脾联合方20g/kg.d灌胃至10周。第11周将大鼠处死,取血并取出甲状腺组织,做HE染色光镜下观察;TGAb、TpoAb、FT3、FT4、TSH按照试剂盒要求检测;肝功能、肾功能、血液分析做生化及计数分析;TNF-α、IL-6用ELISA结果1.模型组血清TGAb和TPOAb较正常组升高,具有显著性差异(P<0.01)。雷公藤治疗组TGAb和TPOAb较模型组降低,有显著性差异(P<0.05);散结消瘿方组及联合方治疗组TGAb和TPOAb较模型组降低,有显著性差异(P<0.01);散结消瘿方组及联合方治疗组TGAb和TPOAb较雷公藤治疗组比较无统计学差异(P>0.05);温肾健脾方组TGAb和TPOAb较模型组差异无统计学意义(P>0.05);散结消瘿方及联合方治疗组组间TGAb和TPOAb比较无统计学意义(P>0.05)。光镜结构:正常组见完整滤泡上皮细胞,背景胶质丰富,呈浓稠片7状分布,滤泡间血管丰富,未见巨噬细胞和淋巴细胞,上皮细胞未见嗜酸性变。模型组甲状腺组织间质内可见广泛的淋巴细胞浸润,甲状腺上皮细胞呈明显的嗜酸性改变,并见淋巴组织分布于小叶内及小叶周边,形成具有生发中心的淋巴滤泡。雷公藤组、散结消瘿方组、温肾健脾方组及联合方治疗组甲状腺组织间质内淋巴浸润较模型组明显减少,小叶内及小叶周边形成具有生发中心的淋巴滤泡较模型组也明显减少。淋巴细胞主要浸润范围及程度较模型组也有所减少,散结消瘿方组及联合方治疗组淋巴细胞浸润程度较雷公藤组及温肾健脾方组明显减少,范围也明显变小,滤泡上皮细胞嗜酸性变较雷公藤组及温肾健脾方组变浅,未见明显淋巴细胞形成的生发中心。2.模型组淋巴细胞浸润程度较正常组明显增多,具有显著性差异(P<0.05)。雷公藤治疗组、温肾健脾方组淋巴细胞浸润程度较模型组显著降低,范围明显缩小,有显著性差异(P<0.05);散结消瘿方组及联合方治疗组淋巴细胞浸润程度较模型组显著降低,范围明显缩小,有显著性差异(P<0.01);散结消瘿方组、联合方治疗组较雷公藤治疗组淋巴细胞浸润程度有所减少,有显著性差异(P<0.05)。温肾健脾方组治疗组淋巴细胞浸润程度较雷公藤治疗组差异无统计学意义(P>0.05)。3.甲状腺功能:TSH含量正常组、模型组、雷公藤治疗组、散结消瘿方组、温肾健脾方组及联合方治疗组间无显著性差异(P>0.05);FT3、FT4含量正常组、模型组、雷公藤治疗组、散结消瘿方组间无差异(P>0.05);温肾健脾方组及联合方治疗组FT3、FT4较模型组有显著性差异(P<0.05)。4.造模前两周模型组与正常组体重、进食量及排泄量无明显差异,从第三周起,模型组大鼠体重增加较正常组明显减缓,进食量相对减少,活动减少,精神欠佳,大便干结,体重、进食量及排泄量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。用药干预后可见温肾健脾方组较模型组、雷公藤治疗组、散结消瘿方组及联合方治疗组大鼠体重增幅明显增大,饮食量、大便量明显增多,活动较其他组频繁。可以看到雷公藤治疗组大鼠食欲减退、活动量少考虑与其胃肠系统副作用有关。模型组体温较正常组明显降低,具有显著性差异(P<0.01)。雷公藤治疗组、散结消瘿方组体温较模型组明无统计学差异(P>0.05);温肾健脾方组、联合方治疗组较其他组体温有所上升,差异有统计学意义(P<0.05)。同时我们可以明显观察到温肾健脾方组、散结消瘿方组及联合方治疗组大鼠活动及精神状态明显好于模型组。5.模型组与正常组肝功能、血白细胞、红细胞、血红蛋白及血小板、肌酐、尿素氮无统计学差异(P>0.05);雷公藤治疗组AST、肾功能、血白细胞、红细胞较正常组有显著性差异(P<0.05);散结消瘿方组、温肾健脾方组及联合方治疗组AST、肾功能、血白细胞、红细胞较雷公藤治疗组有显著性差异(P<0.05);散结消瘿方组、温肾健脾方组及联合方治疗组间无统计学差异(P>0.05)。6.正常组甲状腺组织Fas和FasL免疫阳性物呈浅棕色,在甲状腺上皮细胞表达很少,范围很小,颜色较浅;模型组甲状腺上皮细胞表达Fas和FasL免疫阳性物呈深棕色,表达范围广,颜色深,其OD值与正常组相比有统计学差异(P<0.01)。散节消瘿方组、联合方治疗组较雷公藤治疗组甲状腺上皮细胞表达Fas和FasL颜色显著变浅,OD值有显著性差异(P<0.05)。温肾健脾方组较雷公藤治疗组OD值无统计学差异(P>0.05);散结消瘿方组、联合方治疗组间甲状腺上皮细胞表达Fas和FasL差异无统计学意义(P>0.05)。7.正常组甲状腺上皮细胞表达CD40免疫阳性物呈浅棕红色,表达范围很小;模型组甲状腺上皮细胞表达CD40免疫阳性物呈棕红色,表达范围广,颜色深,其OD值与正常组相比有统计学差异(P<0.01);散节消瘿方组、联合方治疗组甲状腺上皮细胞表达CD40较雷公藤治疗组颜色明显变浅,OD值有显著性差异(P<0.05)。温肾健脾方组较雷公藤治疗组甲状腺上皮细胞表达CD40无统计学差异(P>0.05)。散结消瘿方组、联合方治疗组间甲状腺上皮细胞表达CD40差异无统计学意义(P>0.05)。8.模型组血清TNF-α含量较正常组升高,具有显著性差异(P<0.01)。雷公藤治疗组、散结消瘿方组、联合方治疗组及温肾健脾方组血清TNF-α较模型组降低,有显著性差异(P<0.01);散结消瘿方组及联合方治疗组血清TNF-α含量较雷公藤治疗组及温肾健脾方组降低,具有显著性差异(P<0.01);散结消瘿方组、联合方治疗组间血清TNF-α,差异无统计学意义(P>0.05)。9.模型组血清IL-6含量较正常组升高,具有显著性差异(P<0.01)。雷公藤治疗组、散结消瘿方组、联合方治疗组及温肾健脾方组血清IL-6较模型组降低,有显著性差异(P<0.01);散结消瘿方组及联合方治疗组血清IL-6含量较雷公藤治疗组及温肾健脾方组降低,具有显著性差异(P<0.01);散结消瘿方组、联合方治疗组间血清IL-6,差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.散结消瘿方可以减少自身免疫性甲状腺炎自身抗体TGAb和TPOAb的形成,减少自身抗体对甲状腺组织的损伤。2.散结消瘿方及温肾健脾方都能减少自身免疫性甲状腺炎淋巴细胞的浸润,减轻其炎性反应,可以缩小肿大的甲状腺,但散结消瘿方疗效尤其显著,优于雷公藤及温肾健脾方。3.温肾健脾方可以增加大鼠食欲,进食量及排泄量增大,升高大鼠基础体温,增强甲状腺功能,并使自身免疫性甲状腺炎大鼠基础代谢增加,温肾健脾方与雷公藤相比较,可避免其胃肠反应,有效改善桥本氏甲状腺炎的临床症状。对改善自身免疫性甲状腺炎表现出的甲状腺功能减退症状及调节甲状腺功能效果明显。治疗效果优于雷公藤片及散结消瘿方。4.散结消瘿方、温肾健脾方对大鼠肝、肾功能及血液系统有保护作用,优于雷公藤。5.散结消瘿方、温肾健脾方都能抑制TNF-α、IL-6过度分泌,减轻炎性因子对甲状腺的损伤,但散结消瘿方效果更为明显,优于雷公藤片及温肾健脾方。6.作为第二活化信号的共刺激分子CD40在自身免疫性甲状腺炎中有异常表达,说明CD40与自身免疫性甲状腺炎的发病有关,可以通过Th2途径致病,同时散结消瘿方、温肾健脾方通过减少CD40的表达,减少T细胞的过度活化,减轻免疫应答。7.甲状腺上皮细胞凋亡机制是引起自身免疫性甲状腺炎发病的机制之一。散结消瘿方、温肾健脾方能有效抑制甲状腺上皮细胞的凋亡,逆转甲状腺炎的发生。