目的 本研究以SI作用于新生SD大鼠颅骨OB，采用多次酶消化法分离培养原代OB，E₂作为实验对照组，通过测定生化指标及对细胞形态的观察，研究SI对OB增殖及分化等各方面的影响，并与E₂比较，探讨其机制，为SI预防治疗POP提供科学依据。 方法 1．体外大鼠OB的分离及原代培养：取新生SD大鼠颅骨，采用多次酶消化法分离OB，进行原代体外培养，实验持续24天。Gomori钙钴法进行ALP染色鉴定OB。MTT法测定细胞增殖，绘制生长曲线。茜素红法进行矿化结节染色。2．SI对大鼠OB代谢作用的研究：采用第二继代OB进行实验。（1）剂量分组：实验分为正常对照组（Normal Control组），SI各浓度组(10^-8，10^-7，10^-6，10^-5M)，实验对照组(E₂组，采用10^-10M的E₂)。（2）SI对OB增殖、分化的影响：待细胞贴壁后，换加药培养基，作用48h及72h后，测定细胞MTT（OD）。培养72h后，测定胞浆内蛋白含量、ALP及BGP含量。（3）SI对OB成骨能力的影响：待细胞贴壁后，换加药培养基，培养72h，测定细胞内Ⅰ型胶原合成情况。加药连续培养18天，茜素红染色，镜下计数各组矿化结节。（4）SI对OB合成TGF-β₁的影响：加药培养72h，测定细胞内TGF-β₁的含量。（5）SI对OB内游离Ca²⁺的影响：待细胞贴壁后，换三组培养基(NormalControl组、E₂组、10^-5M SI组)，培养72小时，测定细胞内游离Ca²⁺水平。（6）SI对OB超微结构的影响：加药培养72小时(Normal Control组、E₂组、10^-5M SI组)，透射电镜观察细胞超微结构。 结果 1．体外大鼠OB的分离及原代培养：分离所得细胞具有典型的OB形态学特征，ALP染色阳性率超过95％，可在体外形成矿化结节，鉴定为OB，且纯度较高，功能活跃。生长增殖情况可以清楚的分为潜伏期、对数生长期、平台期、衰退期，符合细胞的生长规律。2．SI对大鼠OB代谢作用的研究：（1）SI对OB增殖、分化的影响：结果显示，体外培养48h及72h，SI各剂量组和E₂组的MTT（OD）值均有显著性增高（P＜0.01），10^-7M-10^-8M SI剂量组低于E₂组（P＜0.01）。与培养48h相比，72h后细胞增殖有所增加，差异有显著性（P＜0.01）。10^-5M-10^-6M SI剂量组和E₂组可增高OB内蛋白含量，差别有天岸惬诱吠闷笋颐法笋夕居戈中文摘要母林场崛护 ，，寻显著性（p<0.01）。51各处理组之l’dJ两两比较，10’SM一10一M组高于10一SM一10·7M组，差异有显著性（P<0.01）。SI和E:均可增高OB内ALP活性和BGP含量 （P<0 .01）。51各剂量组BGP低于E:组，差异有显著性（P<0.01）。以上指标与51剂量呈显著相关（P<0.01）。（2）51对oB成骨能力的影响:10“SM的51和几可显著提高OB形成矿化结节的能力（P<0.01）。与EZ组相比，SI组形成矿化结节的能力较低，差异有显著性（P>0.01）。sI各处理组之间两两比较，10一SM高于10一SM至10一6M，差别有统计学意义（P>0.01）。51和EZ组可增加oB内x型胶原的合成（P<0.01）。与EZ组相比，xo一7M一10·SM 51组细胞I型胶原的合成则较低（P<0.01）。sl各处理组之间两两比较，10-sM一10石M组高于10一SM一10一7M组，差别有统计学意义（P<0.01）。矿化结节与I型胶原的合成和51剂量呈显著相关（P<0‘01）。（3）51对OB合成TGF一pl的影响:10一SM一10一M的sx和EZ组可增加OB内TGFp一l的合成（P<0 .01）。而与EZ组相比，10一SM一10一7M的sI组细胞内TGFp一1的合成较低，差别有统计学意义（P<0.01）。51各处理组之间两两比较，10一SM一10一M组高于20一sM一10一7M组，差别有统计学意义（P<0.01）。（4）51对OB内游离Caz+的影响:10一SM的sI组的细胞内游离c扩十无变化（P>0.05），而E:组则有显著性升高（P<0.01）。（5）SI对OB超微结构的影响:电镜下观察可见供能细胞器和合成细胞器都有所增加，细胞功能更为活跃。 结格1.以新生sD大鼠颅骨为原料，通过多次酶消化法分离得到较高纯度的原代OB，特征典型，数量较多，功能活跃，生长稳定。2.51可刺激OB增殖、分化。高剂量的SI功能更强。3 .51可促进OB成骨功能，高剂量组作用更明显。4.51可增加OB内TGFp一1的分泌。5.51不能影响OB内caz+浓度。6.51对oB的影响，在10.SM一10.SM范围内与剂量相关。7.几可刺激OB增殖分化，增加OB的成骨功能，可从细胞因子和钙离子通道方面影响OB。sl的作用与E:相比，高浓度作用相似，而低浓度则低于马。