论文部分内容阅读
目的:探讨胰岛素样生长因子酸不稳定亚单位(IGFALS)基因多态性与中国儿童汉族人群特发性矮小相关性以及胰岛素抵抗的关系。方法:采用病例-对照研究方法,选取2014年8月至2015年8月在天津医科大学总医院儿科内分泌门诊因身材矮小就诊的患儿,其中诊断为特发性矮小的129例患儿纳入本研究,男孩69例,女孩60例,年龄为3岁~14岁9月,平均年龄为8岁10月,均符合特发性矮小诊断标准。对照组为来自我院同科同期身高正常的儿童131例。男孩72例,女孩59例,年龄3岁6月~13岁9月,平均年龄为8岁11月。所有研究者均需要空腹取外周静脉血,提取全基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)联合直接基因测序技术对研究对象IGFALS基因外显子2进行测序,查找IGFALS外显子2这段基因存在的基因多态性。比较特发性矮小组和正常对照组IGFALS外显子2基因变化频率有无差异。再根据测序结果,按照样本含同义等位基因变化数将特发性矮小组进行分组,分为无等位基因变化组、一个等位基因变化组、两个等位基因变化组、三个等位基因变化组,以此类推,对各组临床指标(身高、体重、BMI)以及生化指标(胰岛素样生长因子-1、胰岛素样结合蛋白3、空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数)进行相关分析;将有意义的基因变化假设为病理性基因变化组,无意义的基因变化假设为良性基因变化组,同样对两组进行上述指标的分析;分别采用单因素方差分析、t检验、c2检验进行统计学分析。P<0.05为结果有统计学差异;统计均在SPSS20.0软件下完成。结果:1.在矮小组和对照组中共同发现8个频率较高的单核苷酸多态性,其中同义突变包括:D70D、A11A、A267A、Y462Y、T522T、A475A,非同义突变包括:E198V、L97F;除此之外,在7个ISS儿童中还发现5个不同IGFALS基因变化,均为非同义突变——单个碱基改变导致编码氨基酸变化(R548W、P307L、A117V、H314R、R306Q),同时在对照组儿童中也发现1个非同义突变(S410L)。发现IGFALS基因多态性同义突变的频率在矮小组和对照组之间差异没有统计学意义(19.5%vs 18.4%,c2=0.286,p=0.319)。而矮小组非同义突变发生率较对照组高,且差异具有统计学意义(17.1%vs 9.2%,c2=3.563,p=0.044)。2.ISS组IGFALS外显子2基因A11A、D70D、L97F、E198V、A267A、Y462Y、A475A、T522T分布均符合Harder-Weinberg平衡(均p>0.05)。3.三个等位基因变化组的身高SDS、IGF-1SDS低于其他三组,具有统计学意义(F=3.340,p=0.022;F=3.769,p=0.014),空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数高于其他三组,具有统计学意义(F=6.682,p=0.000;F=5.888,p=0.001);无等位变化基因组、一个等位基因变化组、两个等位基因变化组之间身高SDS、IGF-1SDS、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数之间无统计学差异(p>0.05)。4.病理性等位基因变化组身高SDS、IGF-1SDS低于良性等位基因变化组,且具有统计学意义(t=2.400,p=0.018;t=2.242,p=0.027)。而病理性等位基因变化组空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数高于良性等位基因变化组,具有统计学意义(t=3.775,p=0.000;t=3.556,p=0.001)。结论1.IGFALS基因非同义突变可能是特发性矮小生长障碍的原因之一。2.推测部分特发性矮小儿童的胰岛素抵抗及IGF-1水平低可能与IGFALS基因变化有关。3.ISS组IGFALS基因存在两个等位基因变化组、一个等位基因变化组与无等位基因变化组身高SDS、IGF-1SDS、IGFBP3SDS、血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数差别无统计学意义(p>0.05);提示IGFALS基因三个以下的同义等位基因变化(本文发现的)可能与矮小无关。