玉米赤霉烯酮的提取纯化及其产生菌的产毒性研究

来源 :齐齐哈尔大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:tcf274617008
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玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是一种危害性极高的真菌毒素,是我国粮食、饲料中必检的有害物之一。国家为确保粮食、饲料等的安全性,检测机构、研究机构以及相关企业常年需要检测监控ZEN的污染情况,而用于ZEN检测的各种色谱法和免疫分析法均需要ZEN标准品作为对照,因此,国内仅在ZEN检测领域就需要大量高纯度ZEN标准物质。但是,现阶段,ZEN标准品并未国产化,所需ZEN多数依赖国外进口,不仅价格十分昂贵,购买流程也十分繁琐。因此,针对ZEN的提取纯化方法、产生菌的性能等相关研究,对于ZEN的国产化生产具有重要现实意义。本论文的研究内容主要包括以下几个部分:1.发霉谷物中ZEN的提取纯化:选取发霉玉米为试验样品,通过优化提取纯化ZEN的方法,确立了制备ZEN的方法,其结果为当玉米样品粉碎时间180 s,采用体积分数为70%的甲醇作为ZEN的提取剂时,ZEN的添加回收率可达到97.01%。虽然该方法可有效提取ZEN,但是由于发霉玉米样品中ZEN含量有限,利用该方法难以进行ZEN的规模化大量生产。2.产毒菌培养最佳条件:选取产生ZEN的禾谷镰刀菌为培养菌株,对禾谷镰刀菌的最适培养基等条件进行了分析,其结果,采用每升超纯水中含葡萄糖60 g、蛋白胨20 g、硝酸钠6.0g、硝酸钾1.5 g、磷酸氢二钾1.0 g、酵母浸出膏1.0 g、氯化钾0.5 g、硫酸镁0.5 g、硫酸铁0.025 g的培养基在摇动速度92 r/min、光照10 h/d、培养温度为22.9℃,培养20 d时,其产生ZEN浓度可达到249.80μg/L,运用该培养条件培养禾谷镰刀菌适用于规模化生产。3.培养液中ZEN的制备:在培养产ZEN的禾谷镰刀菌发酵液的实验基础上,比较不同萃取剂和层析柱对ZEN提取纯化的效果。在单一的萃取剂中,苯的萃取效果最佳,其得率可达到73.20%;Daisogel做为层析柱的填料时对ZEN的纯化效果较好,得率为69.30%;用UPLC-MS对纯化前后的ZEN做比较,可明显看出优化提取纯化方法后ZEN杂峰少,证明从构建的禾谷镰刀菌液体培养发酵液中提取纯化ZEN的方法具有良好的效果。
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