【摘 要】
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目的:尿道狭窄疾病临床疗效差,复发率高,是泌尿外科治疗难点。理想的尿道修复应恢复尿道壁固有层次结构和功能,而组织工程技术将成为新的治疗手段。本研究拟探讨超微超顺纳米磁性氧化铁（USPIO）标记三维细胞膜片技术构建全层仿生尿道用于犬尿道修复与替代的可行性。材料和方法:切取比格犬少量口腔组织和脂肪组织,原代培养犬脂肪干细胞、口腔黏膜上皮细胞和口腔黏膜下成纤维细胞。利用USPIO标记细胞,探索最佳标记浓
【基金项目】
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国家自然基金支持,项目名称:《负载 VEGF 的磁性量子点结合细胞膜片技术构建组织工程尿道的实验研究》,课题编号:81270780； 上海交通大学医学院博士创新基金支持,项目名称:《一种基于脂肪干细胞膜片的新型脱细胞基质材料的制备》,课题编号:BXJ201636；
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目的:尿道狭窄疾病临床疗效差,复发率高,是泌尿外科治疗难点。理想的尿道修复应恢复尿道壁固有层次结构和功能,而组织工程技术将成为新的治疗手段。本研究拟探讨超微超顺纳米磁性氧化铁（USPIO）标记三维细胞膜片技术构建全层仿生尿道用于犬尿道修复与替代的可行性。材料和方法:切取比格犬少量口腔组织和脂肪组织,原代培养犬脂肪干细胞、口腔黏膜上皮细胞和口腔黏膜下成纤维细胞。利用USPIO标记细胞,探索最佳标记浓度,体内外磁共振成像（MRI）评估其示踪时间和示踪效果,在维生素C刺激下制备相应细胞膜片（脂肪干细胞成肌分化膜片、上皮细胞膜片和成纤维细胞膜片）;随后,将细胞膜片卷管构建具有上皮层-成纤维层-肌层结构的细胞膜片仿生尿道,并移植至自体腹股沟皮下促其血管化和加强其生物力学强度,3周后取出并全层管状替代2cm长度阴茎段尿道。本实验将24条比格犬分为4组,每组6只,A组:USPIO标记仿生尿道替代,B组:非USPIO标记仿生尿道替代,C组:商品化小肠黏膜脱基质材料（SIS）尿道替代,D组:单纯管状尿道切除。尿道替代3个月后行尿道造影和MRI评估尿道修复情况,处死实验动物,行大体观察及组织学检测。结果:利用USPIO能有效标记细胞,且在适宜浓度下不影响细胞增殖和分化能力,MRI体内示踪有效时间不少于12周。在该研究中,我们成功在体外构建具有3层结构的细胞膜片仿生尿道并回植体内行全层尿道替代。USPIO标记的细胞膜片仿生尿道（A组）能在移植部位被MRI检测,在T2WI序列显示为低信号。细胞膜片仿生尿道回植替代后3月（B组）,尿道造影显示排尿通畅,而SIS修复组（C组）和D组则全部尿道狭窄或尿瘘。组织学分析显示,仿生尿道（B组）结构层次与正常尿道相似,表现为上皮层、纤维层及肌层结构排列,而C组和D组表现为无上皮结构的纤维瘢痕组织。免疫荧光分析证实,皮下移植3周后,仿生尿道中微血管密度明显升高,体内尿道替代后随着时间延长（回植后3月）,其微血管密度进一步增加,接近于正常尿道组织水平（P>0.05）。结论:利用细胞膜片技术构建细胞膜片仿生尿道可用于全层尿道结构与功能重建,并可被USPIO有效标记和体内示踪。
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