蛹虫草酶解液抗氧化活性研究

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蛹虫草是一种和冬虫夏草同属异种的药食兼用真菌,属真菌门(Eumycota),子囊菌亚门(Ascomycotina)、核菌纲(Pyrenomycetes)、球壳菌目(Sphaeriales)、麦角菌科(Clavicipitaceae)。化学成分于冬虫夏草十分相似,具有调节免疫、抑制肿瘤生长、延缓衰老等相同的药理作用;因其虫草素的含量远高于冬虫夏草,被作为冬虫夏草的替代品,以缓解国内外市场对冬虫夏草的需求。现常用于保健品的开发研究。本文以蛹虫草超临界萃取(SFE)后的残渣为原料,通过蛋白酶解的方法,制备蛹虫草酶解液,采用体外、体内实验研究了其抗氧化性。1.确定以不经蛋白提取而直接对原料进行酶解的方案。这样可综合利用原料中的其它抗氧化活性成分,且更易实现工业化生产。2.筛选制备具有抗氧化活性的蛹虫草酶解液(CMH)所需的蛋白酶。首先通过单因素实验确定水解蛋白酶、复合风味蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶的最适作用pH和温度条件;然后进行单一酶解实验和复合酶解实验,根据酶解液还原力和超氧阴离子自由基清除能力大小,确定了采用中性蛋白酶解的单一酶解方案。该方案获得的蛹虫草酶解液还原力和超氧阴离子自由基清除能力最强,且工艺较为简单。3.运用响应曲面实验设计(RSM),通过部分因子设计(FFD)、爬坡实验设计、中心点实验设计(CCD)三部分实验优化了酶解工艺参数。研究表明,pH=6.5,温度45℃,中性蛋白酶添加量(E/S)7.03%,液固比(W/R)25.41,反应时间4h时,蛹虫草酶解液的还原力A700达到0.465。4.研究了蛹虫草酶解液的水解特性。水解度与时间呈正相关,在水解4h,水解度为6.82%,还原力达到最大值0.463;多肽含量在水解2.5h时达到最大值,4h后开始降低。5.采用分光光度法研究了蛹虫草酶解液的DPPH·自由基清除能力、抑制亚油酸的自氧化能力和还原能力。其中,清除DPPH·自由基的能力方面,BHT>蛹虫草酶解液>α-生育酚;抑制亚油酸的自氧化能力方面,蛹虫草酶解液>α-生育酚:还原能力方面,维生素C(10-2mg/ml)>蛹虫草酶解液(mg/ml)>BHT(10-2mg/ml)。6.体内抗氧化活性研究表明,蛹虫草酶解液(CMH)400 mg/kg可提高机体抗氧化酶活力,具有一定的抗氧化能力,同时可升高免疫器官脏器系数,增强记忆力,能在一定程度上延缓由于注射D-半乳糖引起的小鼠体内的拟衰老变化,为进一步研究蛹虫草酶解液(CMH)的抗衰老作用奠定基础,提供理论依据。蛹虫草酶解液(CMH)200 mg/kg也有延缓模型小鼠体内的拟衰老变化的作用,但是作用较弱,说明蛹虫草酶解液(CMH)的抗衰老作用有剂量相关性。
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