皮蝇素C(Hypodermin C，HC)是皮蝇第一期幼虫在宿主体内移行过程中分泌的一种丝氨酸蛋白酶，对皮蝇有很高的抗原性和特异性，是一种理想的检测抗原。本文首次建立了用毕赤酵母表达系统表达重组HC蛋白的技术，对表达产物进行了生物特性的鉴定，对表达条件进行了优化研究。将经PCR扩增出的HC基因连接到毕赤酵母一大肠杆菌穿梭质粒pPIC9k上，构建重组转移质粒pPIC9k-HC，测序鉴定插入序列。重组质粒线性化后，通过电激转化入酵母细胞GS115中，用组氨酸缺陷培养基筛选含重组质粒的克隆，用含1.0mg／mlG418的YPD培养基筛选含多拷贝质粒的克隆。重组酵母细胞在含甲醇的培养基中分泌产生目的蛋白，培养60小时后收取上清，用阴离子交换层析柱分离纯化。经SDS—PAGE检测发现表达蛋白质的相对分子量约为28 KD，表达上清经超滤浓缩和阴离子交换层析初步纯化，所得纯化产物经Western-blot表明具有与兔抗HC血清特异性结合的能力；明胶电泳检测显示具有水解酶活性。单因素改变表达条件的优化试验结果表明，当甲醇浓度为1.0％，甘油浓度为0.25％，pH值为6.0，诱导60h的情况下表达产量最高，表达量约为121 mg／L，显著高于其他表达方法。用表达纯化的蛋白作为检测抗原，进行了牛皮蝇蛆病ELISA诊断方法的研究：通过对ELISA反应条件的系列摸索，确定了各组分的最适工作条件：抗原的最适浓度为1μg／ml，最佳封闭条件是5％脱脂乳37℃封闭3h，血清的稀释度为1：50，作用时间是37℃2h，二抗的最佳稀释度为1：2000，作用时间是37℃1h，底物在37℃显色10min，根据己经建立的ELISA方法及反应条件，确定阴阳性临界值为0.21。初步研究表明纯化的蛋白具有很好的抗原性，建立的ELISA方法具有较高的特异性，为试剂盒的研制打下了良好的基础。