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虫生真菌是微生物农药资源中重要的组成部分,分离、鉴定并收集保藏虫生真菌,可丰富微生物农药杀虫活性物质的来源。而土壤中蕴含着丰富的真菌资源,是虫生真菌的宝库。本论文是全国土壤虫生真菌分离鉴定项目的一部分,采集了湖南(湘)、湖北(鄂)、河南(豫)、河北(冀)四省的土壤,分离鉴定土壤中真菌的种属。有关这四个省份虫生真菌资源的报道甚少,而这四个省份地形地貌复杂多样,纬度跨度大,气候类型多样,处于黄河和长江流域,农业生产发达。本研究将采集上述各地土壤样品,通过选择性培养基分离其中的虫生真菌,采用形态学与分子生物学相结合的方法鉴定菌种,分析虫生真菌多样性规律,进而,选择代表性菌株测定其对黄条跳甲的生物活性。主要研究结果如下:(1)从四个省份中,采集了245份土壤样品,从其中220份土样中分离得到真菌菌株910株,分离率为89.8%。其中,湖南59份土样中分离出233株真菌,分离率91.5%;湖北63份土样中分离出256株,分离率85.7%;河南70份土样中分离出181株,分离率88.6%;河北53份土样中分离出240株,分离率94.3%;各地平均每份土样分离株数分别为湖南3.9株、湖北4.1株、河南2.6株、河北4.5株。按照植被类型,乔木土样中分离出290株真菌,分离率95.5%;农耕地土样中分离出307株,分离率88.2%;竹林土样中分离出35株,分离率81.8%;杂草土样中分离出278株,分离率88%;平均每份土样分离菌株数分别为乔木4.4株、农耕地3.3株、竹林3.2株、杂草3.7株。(2)根据形态特征及ITS序列分析,鉴定了429菌株,分属49属108种,其中属于已知的虫生真菌种类有7属12种,主要包括淡紫紫孢菌Purpureocillium lilacinum110株、金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae48株、罗伯茨绿僵菌M.robertsii 1株、马昆德绿僵菌M.marquandii 32株、玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea 3株、I.farinosa 1株、I.javanica 1株、球孢白僵菌Beauveria bassiana 10株、Paecilomyces carneus 19株、P.tenuis 2株、粉红粘帚霉Clonostachys rosea 4株,厚垣普奇尼亚菌Pochonia chlamydosporia 5株。各地平均每份土样分离株数分别为湖南1.9株、湖北1.8株、河南1.3株、河北2.1株;不同植被类型平均每份土样分离株数分别为乔木1.8株、农耕地1.6株、杂草1.9株、竹林1.4株。(3)室内条件下,通过浸泡法测定了96株非已知虫生真菌菌株和12株已知虫生真菌对黄曲条跳甲Phyllotreta striolata成虫的生物活性,非虫生真菌中,只有Aspergillus auricomus Aa H4601菌株、Talaromyces verruculosus Tv H24S01菌株、Fusarium solani Fs H5001菌株、Lecanicillium saksenae Ls H29S05菌株、A.granulosus Ag H3104菌株、A.candidus Ac H3103菌株、Monascus purpureus Mp H57S01菌株、A.pseudoviridinutans Ap H3102菌株、A.oryzae Ao H28S02菌株,这9株土壤真菌具有一定的致病性,当处理浓度为1×108spores/m L时,校正死亡率分别是45.24%、31.58%、28.07%、26.32%、26.19%、23.81%、22.81%、21.43%和21.05%。已知虫生真菌中,玫烟色棒束孢I.fumosorosea If H6102和金龟子绿僵菌M.anisopliae Ma B15B01具有较好的活性,当处理浓度为1×108spores/m L时,校正死亡率分别为67.89%、23.56%。(4)不同光周期对玫烟色棒束孢I.fumosorosea If H6102的生长发育和致病力都有影响。全光照条件下菌株产孢最快,孢子活力最强;全黑暗条件下菌落菌丝生长最快,孢子活力最弱;光暗交替下,产孢和菌丝生长处于前两者时间,但其致病力最强。随着菌液浓度提高,其对黄曲条跳甲致死率也越来越高。(5)通过扫描电镜观察,黄曲条跳甲经过If H6102孢子悬浮液处理后,其分生孢子主要附着在触角、足关节、胸部、胸足等刚毛浓密部位和节间膜上。接菌12 h后,分生孢子开始萌发,长出牙管和附着胞;接菌24 h后,大量附着胞形成,菌株开始入侵跳甲体表;接菌48 h后,菌丝开始从体表最薄的节间膜处穿出,长出新的分生孢子梗和分生孢子;接菌后48 h~72 h,菌丝继续生长,逐渐覆盖跳甲体表。