课题背景：消化性溃疡(peptic ulcer,PU)泛指胃肠道黏膜被胃液所消化而形成深达黏膜下层的黏膜破损,可发生于食管、胃、十二指肠,以及胃空肠吻合口、含胃粘膜的Meckel憩室内。临床以胃溃疡(gastric ulcer,GU)和十二指肠溃疡(duodenal ulcer,DU)常见。PU是临床常见病、多发病,呈世界性分布。流行病学调查表明,约有10%的人口在其一生中患过本病。随着H2受体阻滞剂及质子泵抑制剂的相继问世,使溃疡的治愈率大为提高,但溃疡的复发问题仍未得到根本解决。寻求有效的药物治疗以提高溃疡愈合质量,成为当今医药界研究的热点之一中医药在胃溃疡治疗上历史悠久、具有独特优势,因此受到广泛关注。消化性溃疡的发病机理较为复杂,迄今尚未完全阐明。概括起来,本病是胃、十二指肠局部粘膜损害因素和粘膜保护因素之间失去平衡所致。目前认为消化性溃疡是一种多病因疾病,各种与发病有关的因素如胃酸、胃蛋白酶、感染、遗传、体质、环境、饮食、生活习惯、神经精神因素等,通过不同途径或机制,导致上述侵袭因素增强和(或)防护因素减弱,使溃疡发生。近期研究发现,许多细胞因子与胃溃疡的发生、发展及愈合过程密切相关。IL-2是主要由T淋巴细胞分泌的一种淋巴因子,它可以促进T细胞增殖和分化,促进B细胞增殖和分泌抗体,还能促进多种淋巴因子的合成与释放及抗体生成,共同发挥免疫功能,在机体免疫应答、免疫调节、抗损伤和抗肿瘤免疫等方面具有重要的作用。其产生和表达异常,可对机体的免疫调节机能、疾病、损伤等具有提示作用,IL-2水平高低可作为机体细胞免疫功能的重要指标。维胃方是导师临床上治疗胃溃疡的经验方,前期已从一氧化氮、胃泌素、表皮生长因子、神经降压素、氨基己糖、前列腺素等指标进行了研究。本课题是在观察维胃方对实验性大鼠胃溃疡的治疗作用的基础上,应用放射免疫法测定血清IL-2的含量,比较不同剂量维胃方及雷尼替丁对胃溃疡大鼠的免疫学指标有无统计学差异。并从免疫学角度分析溃疡形成原因,探讨维胃方在溃疡愈合过程中可能的作用机制,为中医药的临床运用和开发提供实验依据。实验方法：1、实验分组及给药：雄性SPF级Wistar大鼠56只,体重220-260g,室温22-26℃安静环境下饲养。实验动物严格按完全随机分配原则分为7组,每组8只。正常组：正常饲养；模型组：冰醋酸致大鼠胃溃疡造模术后第4天,处死取材；自愈组：造模后自由饮水、进食,不施加药物干预；维胃方高、中、低剂量组、雷尼替丁组：造模术后第4天开始分别灌服高、中、低剂量维胃方、雷尼替丁混悬液,每日1次,共7天,并正常饮食。除模型组外,其余各组大鼠在造模后第11天处死取材。2、冰醋酸致大鼠胃溃疡模型制备；参照Takagi等的经典造模方法,并加以改进。大鼠造模前24h禁食不禁水,腹腔注射10%水合氯醛麻醉。固定四肢、腹部剃毛、消毒、铺手术洞中,于剑突下腹中线稍左纵向打开腹腔,手术切口长约1-2cm,将胃轻轻移出腹腔,在胃前壁浆膜面靠胃窦侧用100%冰醋酸浸泡过的直径为5mm的圆形滤纸压贴30秒×2次,用生理盐水棉签轻轻抹洗2次,然后将胃还纳腹腔,分层缝合腹壁肌肉和皮肤,75%酒精棉球再次消毒切口及周围。3、标本采集及主要实验方法：3.1血清IL-2含量：腹主动脉采血约3ml于普通负压采血管中,4℃冰箱中静置待自然凝固后,以2000r／min离心10min,分离血清并保存于-20℃冰箱中。采用放射免疫法测定血清IL-2含量,操作严格按照说明书进行。3.2胃液PH值：在剑突下偏左剪开腹部,暴露胃部。结扎贲门,分别于十二指肠和食管处剪断并取出鼠胃,由幽门挤出少量胃液于PH试纸上,读取并记录PH值。3.3溃疡面积：由幽门处向胃内注入10%中性福尔马林溶液10ml,固定10 min后沿胃大弯剪开,展平,用游标卡尺测量溃疡面的最大横径及最大纵径,分别记为d1、d2。溃疡面积(S)按公式S=π×d1×d2×1／4计算(π取3.14)。3.4胃黏膜病理组织切片制备：以溃疡瘢痕平行于胃长轴方向的最长径为中心取材,放入10%中性福尔马林溶液中固定,常规脱水、包蜡、切片、HE染色后于光学显微镜下观察。4、统计学处理实验数据用SPSS13.0统计软件进行分析,数据以均数±标准差(x±s)表示。采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行多个样本均数比较。大鼠溃疡面积、胃液pH值及血清IL-2的比较结果均显示方差齐性,各组间存在差异,采用LSD法检验。显著性水平为P<0.05。主要结果：1、肉眼观察标本：正常组大鼠胃黏膜光整完好。模型组：胃窦处见火山口样溃疡,底部覆盖有黄白苔。自愈组：浆膜面充血,与周围组织粘连,胃窦区黏膜溃疡愈合不全。雷尼替丁组：浆膜面少有粘连,胃窦区黏膜溃疡多数基本愈合,表面粗糙色白。维胃方低、高剂量组：部分可见浆膜面粘连,胃窦黏膜可见少数溃疡点或瘢痕组织增生；中剂量组：浆膜面少粘连,胃黏膜表面多数已愈合,仅见极少溃疡点或小范围瘢痕增生。2、镜下观察病理切片：正常组黏膜层完整,腺细胞排列均匀。模型组溃疡处粘膜缺损大,腺体完全被破坏；黏膜下层毛细血管内见血流淤滞,部分毛细血管破裂、出血,粘膜下层、浆膜层见大量炎性细胞浸润。自愈组：部分黏膜缺损达黏膜肌层,再生腺细胞排列紊乱；黏膜下层有炎细胞浸润,见明显血栓。雷尼替丁组：缺损较小,表面见新生上皮细胞及腺细胞,排列致密不整齐；黏膜下层有炎细胞浸润,肌层见瘢痕纤维形成。维胃方各剂量组：维胃方组低、高剂量组可见缺损达腺细胞层,再生腺细胞密度不匀,黏膜下层炎细胞浸润,其中高剂量组腺体细胞增生数量较多,黏膜下血管未见明显病理改变,但仍有炎性细胞浸润；中剂量组黏膜基本完整,腺体细胞增生数量较多；黏膜下层仅见少量炎性细胞浸润。3、胃液PH值：模型组PH值明显高,与正常组比较差别有统计学意义(P<0.001),各用药组与模型组比较差别有统计学意义(P<0.05)。维胃方中、低剂量组、雷尼替丁组与正常组比较差别无统计学意义(P<0.05),其中维胃方中、低剂量组更接近正常组。4、溃疡面积：用药组与自愈组溃疡面积的差异均有统计学意义；维胃方中剂量组与雷尼替丁组存在显著性差异(P<0.01),表明维胃方中剂量治疗效果优于雷尼替丁。5、血清工L-2含量的比较：各用药组与自愈组的差异有统计学意义(P<0.01)；维胃方中、高剂量组的IL-2水平较高与正常组无显著性差异(P>0.05)；维胃方中剂量与雷尼替丁组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1、动物模型：采用冰醋酸烧灼胃浆膜面形成溃疡的方法,通过肉眼及镜下观察,其表现与人类溃疡极为相似,且造模成功率高,方法简单,可操作性强,是目前普遍认可用于观察药物疗效的模型。2、肉眼观察胃黏膜标本发现,各用药组大鼠溃疡较之模型组及自愈组愈合更好,维胃方各组的溃疡面积均小于自愈组,其中以维胃方中剂量组效果最好。3、光学显微镜下观察胃黏膜病理组织切片,模型组大鼠黏膜各层破坏较严重,黏膜下循环病理改变明显,多数用药组大鼠黏膜愈合较好,其中镜下观察以维胃方中剂量组最佳。4、胃液PH值：模型组pH值明显高于正常组,原因可能为造模后大鼠胃黏膜受损伤,腺体被破坏,泌酸功能随之降低；药物可以使受损胃黏膜修复,促进腺体增生,逐渐恢复泌酸功能。5、血清IL-2：维胃方各组大鼠血清IL-2与自愈组有显著性差异,提示维胃方能通过升高IL-2水平,促进T淋巴细胞增殖分化,改善机体的细胞免疫功能,从而防止溃疡发展,促进溃疡愈合。与雷尼替丁相比较,维胃方中剂量组改善细胞免疫功能的能力更有优势。实验表明,维胃方对大鼠实验性胃溃疡有较好的疗效,其中以维胃方中剂量最佳。推测其促进溃疡愈合的可能机制与提高机体的细胞免疫功能,升高血清IL-2水平有关,其相关机制还有待进一步研究证实。