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趋化肽N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰苯丙氨酸（fMLP）能够诱导中性粒细胞发生多种生物学反应，包括NADPH氧化酶催化的过氧化物生成、游走、肌动蛋白聚合等。fMLP与中性粒细胞表面G蛋白偶联受体结合后，迅速引起磷脂酶C（PLC）激活，进而引起胞浆Ca2+浓度升高和激活蛋白激酶C（PKC）。PKC使NADPH氧化酶胞浆成分p47phox发生磷酸化，并引起p47phox和其它胞浆成分转位到胞浆膜上，与氧化酶膜成分一起形成完整的、有活性的NADPH氧化酶，产生过氧化物。在PKC激活的同时，磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-K）也被激活，PI3-K进一步引起蛋白激酶B（PKB，或称Akt）激活，据研究认为Akt能够激活NADPH氧化酶，而且PI3-K还能够参与中性粒细胞的趋化作用。另外，有证据表明有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPKs）家族的p38 MAPK和胞外信号调节激酶（ERK）也可能调节NADPH氧化酶激活和参与趋化作用。但是有关胞浆Ca2+和PKC、p38 MAPK、ERK、PI3-K激酶在NADPH氧化酶激活和肌动蛋白聚合方面的作用以及有关胞浆Ca2+和这些激酶参与NADPH氧化酶激活和肌动蛋白聚合的信号转导途径仍不清楚。 本研究应用胞浆Ca2+螯合剂和PKC、p38MAPK、ERK、PI3-K激酶抑制物研究了在中性粒细胞样HL-60细胞中这些信号分子对NADPH氧化酶激活和肌动蛋白聚合的作用及某些相互关系，也研究了Ca2+螯合剂、PKC和PI3-K对fMLP诱导Akt激活的作用。为进一步了解和认识NADPH氧化酶激活和肌动蛋白聚合机理及其信号转导途径、以便临床上更好地防治炎症及炎症性疾病奠定理论基础。 首先，为确定胞浆Ca2+和这些激酶在NADPH氧化酶激活过程中的作用，使用不同剂量的Ca2+螯合剂BAPTA-AM、PKC抑制剂GF109203x、p38 MAPK抑制剂SB203580、ERK抑制剂PD098059和PI3-K抑制剂wortmannin处理细胞，然后检测了对过氧化物生成的影响。结果10μmol／L BAPTA-AM和8μmol／L GF109293x均明显地抑制过氧化物产生；50μ mol／L SB203580和50μ mol／LPD098059分别抑制50％和 60％过氧化物生成；0.1μmol／Lwortmannin仅抑制30％过氧化物生成。为了解O2-产生过程中PKC、p38MAPK、ERK和PI3-K激酶对胞浆Ca2+变化是否有调节作用，用激酶抑制剂处理细胞后检测了这几种激酶受到抑制时对utn刺激的胞浆cap变化的影响，结果这些激酶对胞浆cah浓度变化没有明显影响。为澄清胞浆 CaZ＼ PKC和＊－K对 p38MAPK、ERK和Akt激活的调节作用，用Ca‘”螫合剂和PKC、PI3＊抑制剂处理细胞后检测mLP诱导的 p3 8 MAPK、ERK和 Akt激酶活性，结果证实Ca卜、PKC和PI3－K对p38 MAPK激活均有一定的调节作用；而ERK和Akt主要受PI3－K调节。这些结果表明在fMLP诱导的HL60细胞中，胞浆Ca入”KC依赖性途径对NADPH氧化酶激活起着重要作用，而PI3－K依赖性途径包括ERK和Akt仅起到部分作用；这些激酶激活不影响n付＊P诱导的胞浆＊／”变化；ERK和 Akt主要受到 P13l调节，而p38 MAPK则受到胞浆C／”、PKC和N3．K共同调节而参与NADPH氧化酶激活。 为了进一步了解 p3 8 MAPK激活 NADPH氧化酶的机理，用抑制物 SB203580研究了在分化的 HL巧0细胞内 p38 MAPK对fMLP诱导的 p47…叶磷酸化和转位到胞浆膜上的作用。结果发现p38 MAPK激活的动力学与NADPH氧化酶激活动力学一致，50u mol／L SB203580有够完全抑制 p38 MAPK激活，并能明显抑制p38 MAPK对 n47”‘”“体夕磷酸化和 n47”‘””转位至胞浆膜上。这些结果说明在 uLP刺激的分化为中性粒细胞样的 HL60细胞中 P3 8，v＆vx可能通过磷酸化p＃／加”和影响p4v则转位到胞膜一k而参与NADPH氧化酶激活。 肌动蛋白聚合和解聚是中性粒细胞发生趋化作用和运动性的关键。为了解胞浆 Ca卜和 PKC、p3 8 MAPK、ERK、PI3＊这几种信号分子对肌动蛋白聚合的调节作用，用胞浆 ca》螫合剂和这些激酶抑制物处理分化的HL－60 细胞，然后用流式细胞仪检测fMLP刺激的肌动蛋白聚合。结果 0．in mol／L wortmannin明显地抑制了 fMLP诱导的肌动蛋白聚合，而 10 u mol／L BAPTA．AM、8u mol／L GF109293x、50 u mol／L SB203580和 50 u mol／L PD098059对fML诱导的肌动蛋白聚合均无明显影响。这些结果表明肌动蛋白聚合受到 PI3－K调节，而不受胞浆 Ca》和 PKC、p38 MAPK、ERK调节，而且PI3－K调节的肌动蛋白聚合信号转导途径不同于PI3。K调节 ERK和 P3 8 MAPK激活的信号转导途径。