论文部分内容阅读
HLA-G为非经典类MHCⅠ类分子，目前普遍认为是一种致耐受性免疫分子，研究证实可溶性HLA-G二聚体与抑制性受体的结合力较单体更强，可以产生更强的免疫抑制效应。HLA-G分子通过直接与杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)结合，有效地抑制T细胞增殖，抑制NK细胞的杀伤功能，抑制DC的抗原递呈和分泌细胞因子作用。而HLA-G也可以通过间接作用，诱导T细胞分化产生抑制性T细胞，对免疫系统产生持续且深远的影响。对于机体的适应性免疫中的T细胞、DC细胞和固有免疫中的NK细胞的功能，HLA-G的抑制作用目前研究较多，而且认识比较清楚，但是对适应性免疫中的B细胞，HLA-G的作用未见研究，对固有免疫中的巨噬细胞也鲜有报道。本研究的目的在于观察可溶性HLA-G二聚体对于巨噬细胞的吞噬、抗原呈递和对B细胞分化为抗体形成细胞的影响。使用的可溶性HLA-G二聚体由本室的前期构建的人sHLA-G二聚体基因质粒导入721.221细胞株制备的。研究内容简述如下： 一、可溶性HLA-G二聚体在体外促进巨噬细胞的吞噬和抗原提呈能力 从人外周血分离单个核细胞，通过贴壁获得单核/巨噬细胞，在体外培养时加入可溶性HLA-G二聚体，并设置721.221上清组作为对照。加入藻红蛋白（PE）染色的微球使巨噬细胞发生吞噬反应，巨噬细胞吞噬PE微球后被PE染色，流式细胞仪检测各组CD14和PE双阳性细胞所占比例即巨噬细胞吞噬率；用CD14、CD40，CD80，CD83，HLA-DR抗体染色后，用流式细胞仪检测CD14细胞表面CD40，CD80，CD83，HLA-DR这些与抗原提呈密切相关的分子表达水平，借以了解单核/巨噬细胞的抗原提呈能力。结果显示：与对照组相比，实验组MΦ吞噬率显著升高（42.3±17.2 vs49.4±19.9，P=0.0003），具有统计学意义；与对照组相比，实验组MΦ表面CD40、CD80、CD83分子阳性率明显升高（其结果分别为57.4±20.9vs67.1±14.0,12.3±10.2vs20.1±14.9,23.4±13.1vs28.6±13.0，P分别为0.001、0.005、0.002），而且CD40和HLA-DR分子表达的平均荧光强度也有显著升高（其结果分别为1374.8±980.2vs1928.4±1416.8，5263.6±2450.9vs8379.6±3155.6，P分别为0.005、0.016），具有统计学意义。以上结果显示可溶性HLA-G二聚体在体外能够促进巨噬细胞的吞噬和抗原提呈能力。 二、可溶性HLA-G二聚体在体外促进B细胞分化为抗体形成细胞 分离人外周血得到单个核细胞，以PE作为抗原，贴壁单核/巨噬细胞吞噬PE微球后作为抗原提呈细胞，PE微球刺激的悬浮淋巴细胞作为抗原反应细胞。将抗原提呈细胞和抗原反应细胞混合后，在体外培养时加入可溶性HLA-G二聚体，并设置721.221上清组作为对照。第6天收集继续加入吞噬PE微球的巨噬细胞和PE微球进行第二次刺激，继续培养至第9天。用CD19、CD38抗体染色区分浆细胞和其他阶段的B细胞，用PE染色显示表达PE特异性BCR的B细胞，流式细胞仪检测。结果显示：与对照组组相比，实验组在刺激第6天时的CD38+细胞比率显著升高（23.7±7.5vs32.0±7.6，P=0.0004），在刺激第9天时表达PE特异性BCR的B细胞明显增加（9.9±2.5vs16.3±3.2，P=0.03）。以上结果显示可溶性HLA-G二聚体可以显著促进B细胞分化为抗体形成细胞。 本研究结果显示了可溶性HLA-G二聚体在体外能够促进巨噬细胞的吞噬和抗原提呈能力，促进B细胞分化为抗体形成细胞。我们认为HLA-G对于免疫系统具有重要的调节功能。在固有免疫方面，HLA-G抑制NK细胞的杀伤功能，却促进巨噬细胞的吞噬和抗原提呈等功能；在适应性免疫方面，HLA-G抑制T细胞的应答，却促进B细胞的体液免疫应答，即HLA-G抑制Th1应答，促进Th2应答，使Th1/Th2平衡向Th2漂移。本研究的结果有助于认识HLA-G在妊娠、移植、自身免疫性疾病、肿瘤、感染等各种生理和病理状态的作用。