【摘 要】
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[目的]1.探讨miR-4505对高低糖培养下的人肾小球系膜细胞的表达差异性;2.探讨miR-4505是否通过Wnt/β-catenin信号通路调控人肾小球系膜细胞增殖。[方法]1.采用qRT-PCR技术分别检测在高低糖培养下的人肾小球系膜细胞（HMCs）中miR-4505的表达量;2.体外转染 miR-4505 mimic,mimic NC,miR-4505 inhibitor,inhibito
【基金项目】
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云南省基础研究计划（昆医联合专项）（2019FE001（-006））； 云南省中青年学术及技术带头人后备人才（2017HB045）； 云南省医学领军人才（L-2019015）；
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[目的]1.探讨miR-4505对高低糖培养下的人肾小球系膜细胞的表达差异性;2.探讨miR-4505是否通过Wnt/β-catenin信号通路调控人肾小球系膜细胞增殖。[方法]1.采用qRT-PCR技术分别检测在高低糖培养下的人肾小球系膜细胞（HMCs）中miR-4505的表达量;2.体外转染 miR-4505 mimic,mimic NC,miR-4505 inhibitor,inhibitor NC至HMCs,采用qRT-PCR检测HMCs中miR-4505的表达量以评估转染效率;3.采用CCK-8法评估miR-4505对高低糖培养的HMCs增殖影响;4.采用Western blot和qRT-PCR检测miR-4505对高低糖培养的HMCs中Wnt/β-catenin 信号通路相关因子（Wnt5a、Axin1、Dvl3、β-catenin、c-Myc、CyclinD1）表达情况的影响。5.采用SPSS对实验结果进行统计学分析,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。[结果]1.CCK-8法检测高低糖培养的HMCs增殖能力:HMCs在高糖刺激下的增殖效果比低糖更为显著（p<0.05）;qRT-PCR和Western blot检测高低糖培养HMCs 的 Wnt/β-catenin信号通路相关因子（Wnt5a,Axin1,Dvl3,β-catenin,c-Myc,CyclinD1）的 mRNA 和蛋白表达:高糖组 Wnt5a,Axinl,Dvl3,β-catenin,c-Myc,CyclinD1的mRNA表达与低糖组相比显著升高（p<0.01）;高糖组Wnt5a,Axin1,Dvl3,c-Myc,CyclinD1的蛋白表达与低糖组相比显著升高（p<0.001）,β-catenin蛋白表达两组无明显差异（P>0.05）。2.qRT-PCR法检测高低糖培养的HMCs中miR-4505的表达:高糖环境下HMCs中的miR-4505的表达量相较于低糖组明显降低（P<0.05）。3.CCK-8法检测转染miR-4505的高低糖组HMCs结果显示:与对照组相比,过表达miR-4505可抑制HMCs增殖（P<0.01）。4.qPCR法检测转染miR-4505的高低糖组HMCs结果显示:低糖+mimic组与低糖组相比,Wnt5a,Axinl,Dvl3,β-catenin,c-Myc,CyclinD1 的表达量增加（p<0.001）;低糖+inhibitor 组与低糖组相比,Wnt5a,Axin1,c-Myc,CyclinD1的表达量增多（P<0.01）,Dvl3的表达量减少（P<0.001）,β-catenin的表达无明显差异（P>0.05）。高糖+mimic组与高糖组相比,Wnt5a,Axin1,Dvl3,β-catenin,c-Myc,CyclinD1 的表达量减少（p<0.001）;高糖+inhibitor 组与高糖组相比,Wnt5a,Axin1,Dvl3,β-catenin,c-Myc,CyclinD1 的表达量下降（P<0.001）。5.Western blot法检测转染miR-4505的高低糖组HMCs结果显示:低糖+mimic组与低糖组相比,Wnt5a,Axinl,Dv13,c-Myc的表达量显著升高（P<0.001）,β-catenin,CyclinD1 蛋白表达无明显差异（P>0.05）;低糖+inhibitor组与低糖组相比,Wnt5a,Axin1,Dvl3,c-Myc的表达量显著升高（P<0.001）,CyclinD1的表达量下降（P<0.001）,β-catenin蛋白表达无明显差异（P>0.05）。高糖+mimic组与高糖组相比,Wnt5a,Dvl3的蛋白表达量显著升高（P<0.001）,Axin1,c-Myc,β-catenin的蛋白表达量显著下降（P<0.001）,CyclinD1表达量无明显差异（P>0.05）;高糖+inhibitor组与高糖组相比,Wnt5a,Dv13,CyclinD1的蛋白表达量显著升高（P<0.001）,Axin1、c-Myc、β-catenin的蛋白表达量显著下降（P<0.001）。[结论]在高糖环境下,miR-4505可能通过负性调控Wnt/β-catenin信号通路,抑制HMCs增殖。
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