寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）是一种新发的虫媒传播病毒,属于黄病毒属（Flavivirus）成员,主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊叮咬传播。ZIKV感染后80%的成年患者几乎没有任何明显症状,而20%的患者有轻微的症状,通常表现为发热、黄斑皮疹、关节痛、结膜炎、头痛等。ZIKV感染的严重疾病包括先天性小头畸形和神经性格林-巴利综合征等。黄病毒NS1蛋白是7种非结构蛋白中唯一能从感染病人血清中分泌的蛋白。在病毒感染细胞后,NS1能够以可溶的六聚体形式分泌出细胞外,在病毒感染早期即能够在血清中检测到NS1,因此,NS1可作为临床快速诊断病毒早期感染的标志。有研究发现NS1携带的特异性表位会诱导出黄病毒属病毒中无交叉反应的特异性抗体。本研究旨在制备针对ZIKV NS1蛋白的单克隆抗体。以ZIKV的NS1片段为模板进行PCR扩增,连接目的片段和表达载体pET-32a,将其重组作为本实验的表达载体,并用IPTG进行诱导获得重组蛋白。借助蛋白免疫印迹法（Western blotting,WB）和酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbence assay,ELISA）鉴定重组蛋白的特异性,实验结果表明NS1蛋白具有良好的免疫反应性。大量表达重组蛋白,经过包涵体清洗、目的蛋白透析复性、His-taq和分子筛层析等方式纯化后,获得了高纯度的重组NS1蛋白。选取周龄在6⁸周内的BALB/c雄鼠,将获取的高纯度重组蛋白注射到小鼠皮下,分多个点注射,每只小鼠注射的重组蛋白量为100μg,免疫周期为14天。在小鼠接受免疫前,借助间接ELISA试验观察记录目的抗体在小鼠血清中的效价变化。小鼠接受三次免疫后取血清十万倍稀释后血清OD_{4 5 0 n m}≥0.5。加强免疫小鼠脾脏,三天后分离脾脏细胞让其与骨髓瘤细胞SP2/6完成融合,用20%FBS-HAT-DMEM培养基对融合的细胞进行筛选,并使用WB和间接ELISA试验鉴定抗体的特异性,保证最后筛选出的细胞株能正常稳定分泌抗NS1单克隆抗体。本实验成功在大肠埃希菌中表达出纯度较高的重组NS1蛋白,并筛选得到三株活性较高、免疫反应性明显的单克隆抗体,为后续建立针对NS1蛋白的ELISA检测方法及相关研究提供了基础。