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目的本研究拟:(1)检测泪腺腺样囊性癌(lacrimal gland adenoid cystic carcinoma,LGACC)与正常泪腺的差异基因表达谱,筛选与肿瘤发生相关的基因。(2)对层粘连蛋白(laminin,LN)及Ⅳ型胶原在LGACC和正常泪腺中的表达进行mRNA和蛋白质水平的验证,确定其与LGACC病理类型的关系。(3)观察LGACC与正常泪腺的超微结构,明确肿瘤基底膜(basement membrance,BM)改变与病理类型的关系。(4)运用RNA干扰技术研究LAMB1基因对ACC-2细胞系的生物学作用。材料与方法(1)收集LGACC和正常泪腺标本各5例,提取总RNA,体外转录为aRNA,与全基因组基因芯片杂交,生物信息学分析二者的全基因表达谱,获得显著表达差异的候选基因。(2)采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)方法检测ACC和正常泪腺组织LAMB1和COL4A1基因的表达水平;免疫组化方法观察上述基因的蛋白质产物——LN和Ⅳ型胶原在ACC不同病理分型中的分布形式。(3)收集6例LGACC和2例正常泪腺标本行透射电镜检查,观察不同病理分型ACC超微结构的特点和BM形态的改变。(4) PCR检测SGACC-2细胞系上述基因的表达,合成沉默LAMB1基因的siRNA,脂质体转染ACC-2细胞,MTT实验观察RNAi后增殖活性的改变。结果(1)经基因芯片检测,ACC有1103个基因显著上调表达;1001个基因显著下调表达,差异基因主要涉及细胞代谢、通讯、定位、细胞周期,及细胞粘附和增殖等方面。(2) RT-qPCR证实:ACC与正常泪腺相比,LAMB1和COL4A1基因分别上调表达10.06和12.91倍,而PIGR基因下调至0.27倍,与基因芯片结果相符。免疫组化证实ACC较正常泪腺LN及Ⅳ型胶原表达升高,不但瘤细胞胞浆可见染色,在筛状和管状型ACC中,假囊腔的内层、瘤细胞团外周的间质和BM结构呈连续或不连续的条索状染色;实性型染色位于瘤细胞团外周,呈不连续、不规则的条索状。(3)超微结构研究显示,筛状和管状型ACC的BM明显增厚,呈多层,互相交织成网状,肿瘤细胞可伸出伪足侵入BM,使其中断溶解;实性型ACC细胞间界限不清,细胞外堆积大量溶解的细胞外基质,完整BM结构少见。(4)涎腺ACC-2细胞系有LAMB1基因表达,转染沉默该基因的siRNA,可使基因表达降至9%。MTT实验证实转染72小时后,细胞增殖活性明显下降。结论(1) LGACC和正常泪腺的基因表达谱显著不同,基因芯片是筛选肿瘤相关基因的重要工具。肿瘤细胞可明显上调LAMB1和COL4A1的基因表达及LN和Ⅳ型胶原的蛋白质合成,沉默LAMB1基因可致ACC-2细胞增殖活性下降,提示ACC合成细胞外基质有促进肿瘤增殖的作用,可能成为肿瘤治疗的新靶点。(2) ACC的基底膜增厚,结构紊乱,其溶解和中断可能是肿瘤侵袭能力的体现,深入研究可能揭示ACC侵袭和转移的机理。