MicroRNA-137通过抑制TGFA抑制甲状腺乳头状癌的生长和侵袭

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目的:1、多项研究表明miR-137在许多类型癌症的发生和发展中发挥重要作用。因此,我们研究了 miR-137在甲状腺乳头状癌(PTC,papillary thyroid carcinoma)中的作用及其机制。2、转化生长因子 α(TGFA,transforming growth factor alpha)是一种已知的致癌基因,通过预测软件,我们发现miR-137与TGFA存在碱基互补配对关系,所以我们进一步研究miR-137在PTC中是否是通过TGFA来发挥作用的。方法:1、应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)定量测定miR-137在人正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1及人PTC细胞系K1和TPC1中的表达水平。2、根据qRT-PCR结果选择miR-137异常表达最显著的细胞系来构建过表达miR-137的PTC稳转细胞株,并用qRT-PCR来验证过表达效率。3、应用CCK-8实验、细胞克隆形成实验、划痕实验、细胞侵袭实验、细胞周期实验、细胞凋亡实验等细胞实验检测过表达miR-137的PTC稳转细胞株的功能改变。4、应用qRT-PCR和Western blot法检测人正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1及人PTC细胞系TPC1中TGFA的表达水平,同时检测过表达miR-137的PTC稳转细胞株中TGFA的表达改变情况。5、应用荧光素酶报告基因法确定TGFA为miR-137的靶基因。6、收集2017-2019年厦门大学附属中山医院病理科经手术切除且经病理确诊为PTC的组织标本50例,查询患者临床资料,包括患者年龄、性别、肿瘤大小、个数、是否存在甲状腺外侵犯、淋巴结转移情况以及肿瘤的分期情况。免疫组化检测TGFA在PTC组织、癌旁正常甲状腺组织中的表达情况,并采用双盲法进行判读。7、通过使用卡方检验,分析TGFA与患者临床病理之间的相互关系。结果:1、miR-137在PTC细胞系中的表达量显著低于甲状腺正常细胞系,在Nthy-ori 3-1细胞系中表达量中最高,在K1细胞系中的表达量次之,在TPC1细胞系中表达量最低,选择miR-137异常表达最显著的细胞系TPC1用于我们后续的实验中。2、应用TPC1细胞系构建过表达miR-137的稳转细胞株:TPC1/miR-137及空白对照组:TPC1/miR-NC,qRT-PCR显示过表达效率高。3、过表达的miR-137抑制了 TPC1/miR-137细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力,使TPC1/miR-137细胞周期S期停滞,并使其细胞凋亡增加。4、qRT-PCR和Western blot结果显示TGFA在PTC细胞系中的表达量显著高于甲状腺正常细胞系,差异具有统计学意义。而过表达miR-137的PTC稳转细胞株TPC1/miR-137中TGFA的表达水平在基因和蛋白层面上均低于空白对照组TPC1/miR-NC,提示在PTC中miR-137可能抑制TGFA的表达。5、荧光素酶报告基因法证实TGFA是miR-137在人PTC细胞中的直接靶基因。6、PTC组织中TGFA的表达强度及表达频率均明显高于癌旁正常甲状腺组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。7、PTC组织中TGFA表达情况与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤个数、肿瘤是否存在甲状腺外侵犯、是否存在淋巴结转移及肿瘤分期均无统计学意义上的相关性。结论:1、课题以构建miR-137过表达的稳转细胞株为基础,证明了 miR-137在PTC中作为肿瘤抑制因子,其作用是通过抑制TGFA表达来实现的。2、TGFA在人PTC组织中高表达,其表达强度及表达频率明显高于正常甲状腺组织,可能为PTC的诊断和治疗提供新的靶点。
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