论文部分内容阅读
目的:以变应性鼻炎患者和健康对照组外周静脉血中黏膜相关恒定T细胞作为研究对象,研究MAIT细胞在变应性鼻炎患者外周静脉血中的数量变化情况以及激活和免疫功能变化情况,初步明确MAIT细胞是否参与变应性鼻炎的发生发展,同时使用上皮源性细胞因子刺激加重Th2炎症反应,探讨变应性鼻炎中外周静脉血MAIT细胞和Th2炎症反应是否存在潜在的联系。方法:按照既定的纳入和排除标准收取2021年7月至2021年9月期间在南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科收治的变应性鼻炎病人10例作为本实验的研究对象,同时选取同时段就诊于南昌大学第二附属医院体检中心的体检健康者15例作为健康对照组。分别收取空腹外周静脉血,密度梯度离心分离得到外周血单个核细胞,采用流式细胞术分别测定外周血中MAIT细胞含量、CD39+MAIT细胞含量和CD69+MAIT细胞含量,以明确变应性鼻炎患者外周静脉血中MAIT细胞的活化和衰竭情况。同时为了了解变应性鼻炎患者外周静脉血中MAIT细胞免疫功能的变化情况,采用流式细胞术分别测定外周血中IFN-γ+MAIT细胞和TNF-α+MAIT细胞数量,用PMA and Ionomycin混合刺激剂刺激后重复上诉步骤,比较刺激前后的IFN-γ+MAIT细胞和TNF-α+MAIT细胞数量是否存在差异。接着我们采用q RT-PCR分别测定外周血中TSLP、IL-25、IL-33的表达情况,然后使用上皮细胞源性细胞因子hTSLP、hIL-25、hIL-33刺激后,流式细胞术分别测定外周静脉血中MAIT细胞含量,初步探讨变应性鼻炎患者中的MAIT细胞与Th2介导的免疫反应之间是否存在关联。统计学方法:本实验中所有统计分析均采用SPSS21.0软件进行。计量资料数据以均数±标准差(MEAN±SD)计算,在进行统计学处理前对计量数据进行必要的正态分布检验和方差齐性分析,若符合条件,两组间数据采用两独立样本的t检验,若不符合条件两组间数据比较采用Mann–Whitney U检验。认定p值<0.05被认为有统计学差异。结果:1.利用流式细胞术方法分别检测AR患者和健康对照组外周血中MAIT细胞占CD3+T细胞频率和绝对数量,与健康对照组相比,AR患者外周静脉血PBMCs中MAIT细胞的频率[(1.169±0.190)vs(6.605±1.126)P<0.01]和绝对数量[(0.389±0.167)vs(2.151±0.919)P<0.01]均显著下降,差异有统计学意义。2.通过流式细胞术方法分别检测AR患者和健康对照组外周血中CD69+MAIT细胞和CD39+MAIT细胞占总MAIT细胞的比例,结果显示,与健康对照组相比,AR患者外周静脉血CD39+MAIT细胞占总MAIT细胞数量比值[(14.187±3.085)vs(1.738±0.778)P<0.01]和CD69+MAIT细胞占总MAIT细胞数量比值[(58.750±5.751)vs(20.307±5.560)P<0.01]均显著增加,差异具有统计学意义。3.使用流式细胞术技术分别检测AR患者和健康对照组外周静脉血中IFN-γ+MAIT和TNF-α+MAIT细胞占总MAIT细胞的比例,结果表明,与健康对照组相比,AR患者外周血IFN-γ+MAIT细胞[(0.479±0.114)vs(1.104±0.134)P<0.01]和TNF-α+MAIT细胞[(8.107±1.436)vs(11.353±1.597)P<0.01]均显著减少,差异具有统计学意义。用PMA/Ionomycin混合刺激剂刺激后再次检测AR患者和健康对照组外周静脉血中IFN-γ+MAIT和TNF-α+MAIT细胞的比例,结果提示与空白对照组相比,刺激能显著提高AR患者和健康对照组IFN-γ+MAIT细胞[(14.550±4.374)vs(0.479±0.114)P<0.01、(28.560±5.828)vs(1.104±0.134)P<0.01]和TNF-α+MAIT细胞[(38.672±4.133)vs(8.107±1.436)P<0.01、(42.031±4.785)vs(11.353±1.597)P<0.01]水平,差异具有统计学意义,此外,我们发现由AR导致的TNF-α+/MAIT细胞比例下降可以由细胞刺激剂PMA/Ionomycin mixture所逆转[(38.672±4.133)vs(42.031±4.785)P>0.05],而IFN-γ+/MAIT细胞比例下降不能被逆转[(14.550±4.374)vs(28.560±5.828)P<0.01]。4.采用qRT-PCR方法检测AR患者和健康对照外周静脉血中上皮源性细胞因子TSLP、IL-25及IL-33的水平。结果显示,与健康对照组相比,AR患者外周静脉血中TSLP、IL-25及IL-33均显著增加[(1.875±0.084)vs(1.009±0.016)P<0.01、(2.623±0.130)vs(1.007±0.071)P<0.01、(2.832±0.152)vs(1.012±0.063)P<0.01],差异具有统计学意义。经hTSLP、hIL-25和hIL-33刺激后,与空白对照组相比,AR患者外周血中MAIT细胞含量进一步显著下降[(0.632±0.036)vs(1.169±0.190)P<0.01、(0.467±0.025)vs(1.169±0.190)P<0.01、(0.420±0.066)vs(1.169±0.190)P<0.01],差异具有统计学意义,但是在健康对照组中MAIT细胞含量变化不大[(6.909±0.095)vs(6.605±1.126)P>0.05、(6.782±0.217)vs(6.605±1.126)P>0.05、(6.618±0.195)vs(6.605±1.126)P>0.05],差异无统计学意义。结论:与健康对照组相比,变应性鼻炎患者外周血中MAIT细胞的数量减少,并表现为效应功能减退和提前耗竭,提示MAIT细胞参与过敏性鼻炎的发生发展。此外,变应性鼻炎患者外周静脉血中上皮源性细胞因子TSLP、IL-25、IL-33呈现高表达,体外给予hTSLP、hIL-25、hIL-33刺激条件下,变应性鼻炎患者外周血中MAIT细胞数量进一步减少。